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本研究组前期研究发现大肠杆菌麦芽糖结合蛋白（maltose binding protein,MBP）具有免疫增强作用，特别是与BCG共同免疫小鼠后，可协同增强Th1型免疫应答，抑制Lewis肺癌移植瘤及转移瘤生长，但其作用机制尚不清楚。在进一步研究中我们发现，MBP可通过TLR2和TLR4信号通路诱导小鼠腹腔巨噬细胞以及RAW264.7细胞向M1型极化。BCG作为免疫佐剂，可通过TLR2、TLR4和TLR9活化多种免疫细胞。研究发现，TLRs介导的信号传导通路包括MyD88/TRAF6途径以及MyD88非依赖途径(TRIF依赖途径)，这两条途径在调节免疫细胞活化中存在相互协同或相互拮抗作用。因此，我们推测MBP联合BCG诱导的Th1活化可能与TLR2、TLR4和TLR9介导的这两条信号通路的调控有关。本研究以TLRs为切入点，以MyD88依赖途径与TRIF依赖途径为主线，深入探讨MBP联合BCG协同诱导Th1活化的作用机制。通过免疫磁珠纯化小鼠CD4+T细胞，采用CD3和CD28抗体使之活化，检测MBP和BCG对活化的CD4+T细胞TLRs通路相关信号分子的影响；并进一步利用TLR2、TLR4抗体和TLR9抑制剂研究TLR及其介导的信号传导分子在Th1活化中的作用。结果显示MBP通过上调TLR2介导的MyD88/TRAF6表达及TLR4介导的TRIF/TRAF3的表达诱导低水平的Th1活化； MBP联合BCG后，通过显著上调TLR2/TLR9介导的MyD88/TRAF6表达，下调TLR4介导的TRIF/TRAF3表达引起高水平的Th1活化。提示在TLR信号通路中TRAF6上调可促进Th1活化，TRAF3上调则引起相反的作用。此外，本研究还发现TLR4抗体可上调MyD88表达，TLR9抑制剂下调TRIF表达，提示TLR2/TLR4/TLR9在Th1活化中存在cross-talk。我们分别用TLR2/TLR4抗体、TLR9抑制剂和TLR2/TLR4/TLR9激动剂预处理CD4+T细胞，qRT-PCR实验检测TLR2/TLR4/TLR9的mRNA水平。结果提示在MBP联合BCG诱导的Th1活化中，TLR4可抑制TLR2介导的信号传导；TLR9可促进TLR2和TLR4介导的信号传导，说明三者之间存在cross-talk，并且TLR9在其中发挥关键作用。本研究结果表明，MBP可直接诱导活化的CD4+T细胞发生Th1极化，与BCG连用，可协同增强这一作用。阐明了MBP联合BCG可显著活化TLR2/TLR4/TLR9介导的信号通路，三者的cross-talk所诱导的TRAF6上调和TRAF3下调促进Th1活化。揭示了TLRs介导的TRAF6和TRAF3的平衡在Th1活化中起重要作用。本研究为MBP联合BCG作为一种新型免疫增强剂的开发提供理论基础，为研究TLR间的cross-talk在诱导Th1活化的作用机制提供了新的研究思路，为进一步开发有效的肿瘤治疗乃至肿瘤预防的生物药奠定实验基础。