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目的:研究蛛网膜下腔脑脊液中的α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)经胶质淋巴系统内流进入脑组织的过程及其对脑功能的影响。方法:1.荧光示踪剂法观察胶质淋巴液内流:采用小脑延髓池注射脑脊液荧光尸胺(A488-ca),分别在10 min和30 min之后灌流固定,然后取脑做振动切片,在荧光显微镜下观察拍照,采用ImageJ软件计算分析荧光示踪剂在脑内的渗透面积;注射10 min后取脑组织,切片观察示踪剂进入脑内的途径并且进行免疫染色,激光共聚焦显微镜下拍照,观察示踪剂被细胞吸收的情况。以此来评价脑内胶质淋巴系统内流情况。2.脑脊液中α-syn经胶质淋巴系统进入脑组织:经小脑延髓池分别注射荧光标记的α-syn(SYN-488)和无荧光标记的α-syn(Hm-SYN),30 min之后灌流固定,取脑做振动切片,免疫荧光染色,激光共聚焦显微镜下观察拍照;采用不同年龄段A53T转基因小鼠,免疫荧光染色;观察脑脊液中α-syn沿着血管周隙进入脑组织以及被细胞摄取的情况。3.脑脊液中α-syn对胶质淋巴系统功能的影响:采用C57BL/6小鼠,小脑延髓池注射Hm-SYN,40 min后再注射脑脊液荧光示踪剂(FITC-d3、OA-45)测定胶质淋巴系统内流的情况;选用8-12月龄A53T转基因小鼠,小脑延髓池注射荧光示踪剂(OA-45+FITC-d3),分别在30 min和90 min之后灌流固定,然后取脑做振动切片,荧光显微镜下观察拍照,采用ImageJ软件计算分析荧光示踪剂在脑内的渗透面积,分别代表蛛网膜下腔的荧光示踪剂进入脑内及从脑内清除的情况,用以评价胶质淋巴系统功能。结果:1.荧光示踪法观察胶质淋巴液内流:A488-ca能够快速的进入到脑组织中且具有时间和区域依赖性;A488-ca比我们常用的脑脊液示踪剂OA-45进入脑组织的速度的更快扩散面积更广;此外,A488-ca也能够沿着血管间隙以及软脑膜进入脑实质中;更重要的是,我们发现与OA-45相比A488-ca更容易被星形胶质细胞和神经元所摄取,能更忠实地反映脑脊液内流到脑组织的过程。2.脑脊液中α-syn经胶质淋巴系统内流进入脑组织:经小脑延髓池注射后,SYN-488和Hm-SYN均能沿着血管间隙进入脑组织,且在大脑皮层都能被细胞吸收,在黑质部位形成聚集体;2-4月龄A53T转基因小鼠脑内几乎没有α-syn聚集体的形成,8-12月龄小鼠脑内可以观察到α-syn聚集在血管周隙以及神经元内,16-18月龄小鼠脑内有大量α-syn聚集体的存在。3.脑脊液中α-syn内流对胶质淋巴系统功能的影响:与Control组相比,在不同切片部位,SYN组小鼠在注射FITC-d3、OA-45后30 min时进入脑内的量明显减少(P<0.05);与WT组相比,在不同切片部位,A53T组小鼠OA-45和FITC-d3在注射后30 min时入脑量显著减少(P<0.05),而注射90 min时脑内残余量较多(P<0.05)。结论:蛛网膜下腔脑脊液中的α-syn能够通过血管周隙内流进入脑组织且降低胶质淋巴系统的功能。