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肿瘤是机体细胞失去正常调控而发生的一种异常增殖现象，癌基因激活和抑癌基因失活引起的细胞周期调控失常是肿瘤发生发展的重要原因。 骨肉瘤(osteosarcoma,OS)是最常见的原发于骨组织的恶性肿瘤，占骨原发恶性肿瘤的20％，其生物学行为呈高度恶性，生长快，早期即易发生血道转移，虽然近年来新辅助化疗和保肢术的应用大大改善了骨肉瘤患者的预后，但其仍为一死亡率致残率较高的恶性疾病。 INK4a／ARF(cyclin dependent kinase 4 inhibitor a／alternative reading flame)基因位点位于人类染色体9P21处，可通过阅读框架的变化编码两种抑癌蛋白：P16INK4a和P14ARF，二者均参与对细胞周期的调控。P14ARF可通过P53途径和E2F-1途径负性调节细胞周期，使细胞周期在G1期发生停滞，从而抑制细胞的过度增殖来发挥抑癌作用；P53是抑癌基因，可通过多种机制负性调节细胞周期，促进缺陷细胞的凋亡，从而抑制细胞异常增殖；E2F-1是转录因子家族成员之一，活化后可引起与DNA合成有关的靶基因表达，以促进DNA合成，引起细胞增殖。P14ARF可通过与MDM2的相互作用而降低MDM2介导的对P53的降解作用，稳定P53，使P53在细胞核中累积而引起细胞周期停滞或凋亡；另外P14ARF可通过多个结合结构域与转录因子E2F-1结合，下调E2F-1的转录活性，促使细胞周期停滞，引发E2F-1依赖性细胞凋亡。作为新发现的抑癌基因，P14ARF及其作用通路在骨肉瘤中联合表达的研究国内外尚未见报道。 目的：本研究采用免疫组织化学技术，检测P14ARF、P53和E2F-1在人骨肉瘤中的表达，并分析各研究指标之间的相互关系，探讨它们在人骨肉瘤发生发展中的作用，为阐明骨肉瘤的发病机制、辅助诊断和基因治疗提供理论依据和实验基础。 材料与方法：本研究收集手术切除或切取活检的30例人骨肉瘤石蜡标本，所有2004年郑州大学硕士研究生毕业论文人骨肉瘤中P14A只F、P53和曰F一1的表达及其意义标本均经病理证实并依据细胞和组织分化程度分为三级:I级8例，11级12例，111级10例，所有病例术前均未放化疗。以10例骨软骨瘤(osteoehondroma，OC)石蜡标本作为对照。采用免疫组化S一P法，检测P14ARF、P53和EZF一1蛋白在人骨肉瘤中的表达。所有资料采用SPSS10.0软件处理，以泛二0.05作为检验标准。结果:1.P14ARF蛋白的表达:1.1骨软骨瘤组P14ARF染色阳性率为90.0%(9/10)， 其中阴性(一)1例，弱阳性(+)3例，中度阳性〔++)4例，强阳性(+++) 2例;骨肉瘤组P14ARF染色阳性率为43.3%(13召0)，其中阴性(一)17例， 弱阳性(十)8例，中度阳性(+十)4例，强阳性(+十十)1例。两组间染色 阳性率和染色强度均有显著性差异(P<0 .05)。1.2骨肉瘤I级组P14ARF染色 阳性率为75.0%(6/8)，其中阴性(一)2例，弱阳性(+)3例，中度阳性(++) 2例，强阳性(+++)1例;n、m级组P14ARF染色阳性率为31.8%(7忍2)， 其中阴性(一)15例，弱阳性(十)5例，中度阳性(++)2例。两组间染色 阳性率和染色强度均有显著性差异(尸<0.05)。2.P53蛋白的表达:2.1骨软骨瘤组染色阳性率为10.0%(1八0)，其中阴性(一) 9例，中度阳性(++)1例:骨肉瘤组染色阳性率为50.0%(15/’30)，其中阴 性(一)15例，弱阳性(+)4例，中度阳性(+十)4例，强阳性(十+十)7例。 两组间染色阳性率和染色强度均有显著性差异(P<O.05)。2.2骨肉瘤I级组 染色阳性率为25.0%(2，/8)，其中阴性(一)6例，中度阳性(++)1例，强 阳性(+十十)1例;11、皿级组染色阳性率为59.1%(13爪2)，其中阴性(一) 9例，弱阳性(+)4例，中度阳性(++)3例，强阳性(十十十)6例。两组间 染色阳性率和染色强度无显著性差异(P>0.05):3，EZF-1蛋白的表达:3.1骨软骨瘤组染色阳性率为20.0%(2，/10)，其中阴性 (一)8例，弱阳性(+)2例:骨肉瘤组染色阳性率为73.3%〔22/30)，其中 阴性(一)8例，弱阳性(+)13例，强阳性(+十)9例。两组间染色阳性率 和染色强度均有显著性差异(尸<O‘05)，12骨肉瘤I级组染色阳性率为:37 .5% (3了8)，其中阴性(.)5咧，弱泪性、、)2例.强泪性(十一)1例:H、[II 级组染乞阳性率为肠.生件交19二二、，其中昵性:、.)3列，弱石性(衬n咧， 强旧性(_十二)8列，两组闰染色花生至礼染色强变均有显著性盖异甲<0.05、，，2004年郑州大学硕士研究生毕业论文人骨肉瘤中P14ARF、P53和EZF一1的表达及其意义 4.在30例骨肉瘤组织中，13例P14A获卫蛋白表达阳性的病例中，P53蛋白表达 阴性者10例:15例P53蛋白表达阳性的病例中，P14ARF表达阴性者12例; 两者均阳性表达3例;均阴性表达5例。P14ARF和P53的表达具有负相关 关系(P<0.05)， 5.在30例骨肉瘤组织中，13例P14ARF蛋白表达阳性的病例中，EZF一1蛋白表 达阴性者5例:22例EZF一1蛋白表达阳性的病例中，P14ARF蛋白表达阴性 者14例;两者均阳性表达8例;均阴性表达3例。P14ARF和EZF一1之间的 表达关系无统计学意义(P>O.05)o 结论: 1.P14A丑f在骨肉瘤中表达下调，并随着病理分级的增高而降低，提示其与骨 肉瘤发生发展