胆红素氧化酶的分离纯化及其性质的研究

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露湿漆斑菌发酵4天后,从发酵液中通过盐析、透析浓缩、SephadexG—100凝胶柱层析,分离纯化出胆红素氧化酶,通过SDS-聚丙烯酰胺电泳鉴定,显示为一条带,分子量为68kDa左右。通过紫外诱变选育到两株产酶能力稍高的菌株,其产酶能力是原先的1.5~2倍。该酶在37℃以胆红素为底物的Km值为150μmol/L,最适反应温度为50℃,从60℃开始酶的稳定性变差。该酶在pH7.5时酶促反应最快,酸碱稳定性较高,金属离子对酶促反应有很大影响,EDTA、尿素等能提高酶促反应。利用胆红素氧化酶可用来测定胆红素含量,进行总胆红素测定实验时表明该酶用于诊断具有线性范围较宽、准确性和精密度都较好,可为黄疸等肝胆疾病的诊断提供可靠的依据。
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