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背景在中国,膀胱癌是最常见的泌尿系肿瘤。以顺铂为基础的联合化疗是除根治性膀胱癌切除术外治疗肌层浸润性膀胱癌的主要手段,但其化疗反应率较低;FGFR3已被证实在膀胱癌中发挥致癌作用,其S249C点突变在膀胱癌中较常见,但FGFR3S249C突变是否参与膀胱癌的化疗抵抗尚不得而知。
目的检测FGFR3S249C突变是否降低膀胱癌细胞对顺铂的敏感性;研究FGFR3S249C突变是否通过AKT通路促进膀胱癌细胞的化疗抵抗作用;探讨抑制AKT活性,顺铂对膀胱癌细胞生物学功能的影响。
方法以不同浓度的顺铂作用48h,采用CCK8检测膀胱癌细胞97-7(FGFR3S249C),5637(FGFR3WT)和T24(FGFR3WT)的活性,并计算IC50。Westernblot检测上述细胞中P-AKT,Total-AKT的蛋白水平。SiRNA-FGFR3转染97-7(FGFR3S249C)细胞48h,降低FGFR3的水平后采用westernblot检测P-AKT,Total-AKT的蛋白情况。利用GDC0068和LY294002抑制97-7(FGFR3S249C)细胞中AKT的活性,通过CCK8检测顺铂敏感性的变化。顺铂联合GDC0068或LY294002作用97-7(FGFR3S249C)细胞,分别利用CCK8和流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡情况;
结果与FGFR3野生型的膀胱癌细胞5637和T24比较,97-7(FGFR3S249C)细胞对顺铂的敏感性显著降低,P-AKT/Total-AKT比值升高。SiRNA干扰FGFR3的表达可以降低P-AKT/Total-AKT的比值。GDC0068和LY294002抑制AKT的活性,可以增加97-7(FGFR3S249C)细胞对顺铂的敏感性,增加顺铂对细胞增殖的抑制和对凋亡的诱导作用。
结论1.FGFR3S249C突变可通过激活AKT通路降低膀胱癌97-7对顺铂的敏感性;2.抑制AKT活性时,顺铂对膀胱癌细胞的增殖抑制作用及凋亡诱导作用增强。因此提示FGFR3S249C突变有可能为膀胱癌的治疗提供新的理论基础和靶点,对于提高治疗效果具有十分重要的意义。
目的检测FGFR3S249C突变是否降低膀胱癌细胞对顺铂的敏感性;研究FGFR3S249C突变是否通过AKT通路促进膀胱癌细胞的化疗抵抗作用;探讨抑制AKT活性,顺铂对膀胱癌细胞生物学功能的影响。
方法以不同浓度的顺铂作用48h,采用CCK8检测膀胱癌细胞97-7(FGFR3S249C),5637(FGFR3WT)和T24(FGFR3WT)的活性,并计算IC50。Westernblot检测上述细胞中P-AKT,Total-AKT的蛋白水平。SiRNA-FGFR3转染97-7(FGFR3S249C)细胞48h,降低FGFR3的水平后采用westernblot检测P-AKT,Total-AKT的蛋白情况。利用GDC0068和LY294002抑制97-7(FGFR3S249C)细胞中AKT的活性,通过CCK8检测顺铂敏感性的变化。顺铂联合GDC0068或LY294002作用97-7(FGFR3S249C)细胞,分别利用CCK8和流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡情况;
结果与FGFR3野生型的膀胱癌细胞5637和T24比较,97-7(FGFR3S249C)细胞对顺铂的敏感性显著降低,P-AKT/Total-AKT比值升高。SiRNA干扰FGFR3的表达可以降低P-AKT/Total-AKT的比值。GDC0068和LY294002抑制AKT的活性,可以增加97-7(FGFR3S249C)细胞对顺铂的敏感性,增加顺铂对细胞增殖的抑制和对凋亡的诱导作用。
结论1.FGFR3S249C突变可通过激活AKT通路降低膀胱癌97-7对顺铂的敏感性;2.抑制AKT活性时,顺铂对膀胱癌细胞的增殖抑制作用及凋亡诱导作用增强。因此提示FGFR3S249C突变有可能为膀胱癌的治疗提供新的理论基础和靶点,对于提高治疗效果具有十分重要的意义。