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目的:乙型肝炎是一种流行范围广、危害程度大的世界性传染病。我国是此病的高发区,乙肝携带者占到国民总数1/10以上,正确认识乙肝病毒(HBV)高突变、多亚型的遗传异质性,对发病机制研究和临床病毒诊疗均有重大意义。基于其广泛存在的准种现象,本实验拟采用长片段高保真聚合酶链反应(LA-PCR)方法,对成都地区HBV基因型分布试作调查。方法:设计合成HBV基因组间同源性较高的表面抗原蛋白(HBsAg)编码区特异引物,对90例已确诊的HBV-DNA阳性感染者血清裂解物进行高保真PCR扩增。采用双脱氧链末端终止法(Sanger法)测序技术对所获得PCR产物进行测序;测序结果与GeneBank标准序列比对分型,并分析其准种特征。同时,采用文献中常用的型特异引物分型法作为标准对照,通过使用B、C、D三种基因型的特异引物组进行巢式PCR扩增检验,比较两种方法的分型结果以评估其可靠性和准确性。基因型和混合型;基因型特异引物分型法检测结果为:B型43例(47.8%),C型21例(23.3%),D型3例(3.3%),B/C混合型22例(24.4%),B/D混合型1例(1.1%)。测序结果显示了HBV基因组中存在高度变异性的遗传特征,不仅同一基因型内广泛存在多态性和异质性,有些患者体内的HBV病毒株也以多克隆的准种形式存在。结论:基因分型结果表明成都地区HBV优势基因型以B型为主,C型次之,偶见D型。这与文献报道我国南方主要流行基因型为B型一致。对乙型肝炎患者血清病毒的测序图进一步分析表明,LA-PCR扩增产物并非序列完全一致的单一克隆,而是一个以优势株为主的相关突变株病毒群(准种)。S基因直接测序法能够准确地鉴定出相关突变株病毒群中的优势株基因型。因而与型特异引物分型法相比,排除了非优势突变株产生的假阳性干扰,更好地反映出了HBV基因的多克隆准种特征,此结果差异具有统计学显著性意义(P<0.001)。实验结果证实了HBV高突变易重组及存在准种现象的遗传学特征,其遗传异质性,特别是一些重要多态位点的进化意义以及对于乙肝诊疗、预后的影响尚有待进一步研究。