【摘 要】
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花生叶是花生种植时主要的副产物之一,这部分资源因研究较少而被浪费,通过开发富硒花生叶产品,科学客观地评价花生叶中生物活性物质对资源合理利用、延长花生产业链具有极大地促进作用。本文以富硒花生叶为原料,采用蛋白质组学对富硒前后及不同富硒浓度花生叶可溶性蛋白变化进行分析;基于蛋白质组学结果对潜在过敏原致敏性进行了计算模拟分析;采用响应面试验法对花生叶多糖提取工艺进行了优化;对纯化后多糖结构和生物活性进行
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花生叶是花生种植时主要的副产物之一,这部分资源因研究较少而被浪费,通过开发富硒花生叶产品,科学客观地评价花生叶中生物活性物质对资源合理利用、延长花生产业链具有极大地促进作用。本文以富硒花生叶为原料,采用蛋白质组学对富硒前后及不同富硒浓度花生叶可溶性蛋白变化进行分析;基于蛋白质组学结果对潜在过敏原致敏性进行了计算模拟分析;采用响应面试验法对花生叶多糖提取工艺进行了优化;对纯化后多糖结构和生物活性进行测定。结果如下:1.从富硒前后及不同富硒浓度花生叶中共鉴定出312种差异蛋白。GO功能注释显示大部分蛋白参与代谢过程、细胞过程、单一生物过程等生物过程。KEGG通路分析表明,大多数差异蛋白与能量代谢、碳固定、碳代谢有关。硒会在植物体内引起氧化应激,降低光合作用和能量代谢速率,硒在一定程度上刺激植物产生胁迫相关蛋白,进而引起部分过敏原和潜在过敏原含量的增加。2.对蛋白质组学分析中鉴定到的潜在过敏原Bet v 1蛋白,利用多种在线数据库和模拟分子对接方法分析其致敏性。预测结果表明Bet v 1中较多序列片段被认为是抗原表位且与花生过敏蛋白8亚型最为相似。抗体模拟对接结果显示Bet v 1相较于过敏原病程相关蛋白10和花生过敏原蛋白8,具有更加稳定的抗体结合能量和结合方向,表明Bet v 1可能是花生叶中主要的过敏原。3.利用响应面试验法对水提醇沉提取花生叶多糖工艺进行优化。试验结果表明,模型R2=0.9972表明拟合情况良好,浸提时间对多糖得率影响最大,其次是浸提温度和料液比。最优多糖提取工艺条件为:料液比1:20、提取温度87℃、浸提时间3.15 h。经验证多糖提取率为3.73±0.05%,多糖含量为70.43±0.68%,蛋白质含量7.56±0.07%。聚酰胺最佳处理条件下多糖保留率和蛋白脱除率分别80.94±2.17%和81.36±0.49%。纯化后发现花生叶多糖主要是中性多糖,无富硒多糖和富硒多糖的多糖含量分别为88.8±1.39%和89.03±1.81%。4.对花生叶多糖的性质进行分析,发现粗多糖具有良好的乳化活性和乳化稳定性;红外光谱检测到Se-C特征峰,同时X射线能谱在多糖表面检测到硒,说明硒有效地结合到多糖之中。花生叶多糖生物活性测定表明其具有较好的自由基清除活性和还原力,同时能有效地抑制α-淀粉酶活性,富硒前后生物活性无显著差别。
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