团头鲂肠道粘液细胞分布和两种黏蛋白基因克隆及表达分布

来源 :南京农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:huohuonan
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
粘液(mucus)是以黏蛋白(mucins)为基础骨架成分的高水分粘性液体。鱼类的皮肤、鳃及消化道上覆盖着一层粘液,主要是由上皮中的粘液细胞(mucous cells)大量分泌。鱼类粘液在鱼体防御外界病原侵袭、信息传递、调节渗透压等方面具有重要作用,与其相关的研究正受到广泛的关注。本研究运用组织切片技术,以阿新蓝-过碘酸雪夫氏染色方法(AB-PAS)观察了健康团头鲂(Megalobrama amblycephala)消化道粘液细胞的类型,并统计了消化道不同部位粘液细胞的数量。显微镜观察团头鲂消化道存在四种不同被染颜色的粘液细胞:Ⅰ型,AB-PAS染色呈红色,含有中性黏蛋白;Ⅱ型为蓝色,含酸性黏蛋白;Ⅲ型为紫红色,同时含有酸性黏蛋白和中性蛋白,以中性黏蛋白为主;Ⅳ型为蓝紫色,同时合有两种黏蛋白,以酸性黏蛋白为主。细胞计数统计结果表明各部位黏液细胞总密度从前向后依次增大,且都大于食道黏液细胞总密度,后肠黏液细胞要明显多于其他部位。实验结果可为团头鲂消化道研究提供基础数据参考。根据已知的脊椎动物黏蛋白基因序列及实验室完成的团头鲂转录组数据库的基因部分片段,克隆获得团头鲂Muc2和Muc5b mRNA的部分序列,并通过实时荧光定量PCR (qRT-PCR)选择合适的内参基因(reference gene)作为本研究的管家基因(House-keeping gene),分析了Muc2和Muc5b在团头鲂不同组织的表达分布。氨基酸序列分析结果显示,团头鲂Muc2和Muc5b与鲤等脊椎动物有较高的同源性,其N端含有11p15黏蛋白(该类黏蛋白基因位于11p15染色体上)特异性结构域:VWD区域(von Willebrand D domain, Pfam00094保守结构域),C8区域(Pfam08742保守结构域,富含半胱氨酸,通常与VWD相邻出现),TIL区域(trypsin inhibitor-like, Pfam01826保守结构域,富含半胱氨酸)。四种内参基因(18S; RP||; Rpll3α;β-Actin)比较结果表明,RPII为本实验中团头鲂九个不同组织的最优HK基因。组织表达分析结果表明Muc2主要在前肠、中肠、后肠中高表达,在其他六个组织中不表达;Muc5b在鳃和表皮表达量相对较高,在脑、脾、肾中表达水平较低,在肝、肠道不表达。这为团头鲂黏蛋白基因研究提供了序列参考,也为在鱼类黏蛋白组织分布研究时提供数据。根据组织表达分布的结果,作者分别测定了团头鲂在饥饿胁迫20天后重摄食肠道内Muc2的变化,以及团头鲂在捕捞应激后鳃和表皮中Muc5b的表达变化。结果表明团头鲂在饥饿20天后重新摄食,肠道内Muc2表达首先急剧降低,16 h后重新恢复到正常水平;团头鲂在捕捞应激后1 h时鳃中Muc5b显著降低(P<0.05),24h时恢复初始水平;表皮中4 h时Muc5b显著上升(P<0.05),24 h时恢复到初始水平。
其他文献
利用皱纹盘鲍担轮幼虫及成体精巢直接制备染色体标本法和胰酶消化法、碱性低渗液处理法、Ag-NORs显带技术,研究了中国皱纹盘鲍、日本皱纹盘鲍、中国皱纹盘鲍与日本皱纹盘鲍杂
采用冷休克、热休克、6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)抑制第一次卵裂制备栉孔扇贝四倍体.由所采用处理方法的作用机理,结合栉孔扇贝第一次卵裂的分期分析,确定各不同处理方法的处理
近年来随着国家对健康养殖、安全养殖的要求逐渐提高,对于水产养殖中用药的规定和限制越来越严格。微生态制剂越来越受到重视。微生态制剂是由一种或者多种细菌制成的产品,一
该研究对黄渤海山东沿岸的海洋鱼类寄生粘孢子虫首次进行了较为系统的报道对自47种鱼类寄主体内检获的36种粘孢子虫的形态学、分类学、寄主及寄生部位、地理分布、感染率与感
该论文从广泛的国际背景入手阐述了海洋法的历史发展与特点,重点分析了作为海洋管理最重要、最基本的的法律文献《公约》主旨内涵、内在创新意义,深入探讨了其中最富创新精神
该文分两个部分.第一部分研究臭氧生成氧化物的衰减,臭氧生成氧化物对扁藻的毒害作用和臭氧生成氧化物对中国对虾虾卵和各期幼体的毒害作用.第二部分研究了臭氧处理海水总氧
在水产养殖中,不同类型饵料对鱼类的机体成分、血清成分、消化酶活性、机体免疫及脂质代谢等方面都会产生相应的影响。生物饵料如轮虫,枝角类是大部分鱼类幼鱼生长阶段的重要
本文测定了同池混养的1龄建鲤(Cyprinus carpio var.jian).荷包红鲤(Cyprinus carpio var.wuyuanensis)背部肌肉的脂肪含量(intramuscular fat,IMF)和脂肪酸组成,比较发现,两
该文用PCR方法快速制备地高辛标记DAN探针,斑点杂交和原位杂交检测十六种实验动 动物体带毒状况.用该探针与随机引物合成探针检测样品,结果一致.运用斑点杂交和原位杂交方法,