台湾金线莲离体快繁体系的建立与代谢调控研究

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台湾金线莲(Anoectochilus formosanus Hayata)是一种濒危珍稀的药用植物。为了更好地保护、开发和利用这一传统珍贵药材,本研究运用植物离体快繁技术,以野生台湾金线莲作为外植体,诱导出丛生芽,将丛生芽进行生根成苗培养,建立了稳定的台湾金线莲丛生芽诱导和成苗培养体系。将试管苗移栽到不同的栽培基质中,考察试管苗的成活率和酶活性变化。研究了真菌诱导子对台湾金线莲植株鲜重、干重、增殖倍数、总黄酮含量和总黄酮产量的影响。在本研究条件下,对试管苗进行了镇痛活性初步研究。丛生芽诱导的最佳培养条件为:H+NAA 0.8 mg·L-1+6-BA 1.0 mg·L-1+蔗糖20g·L-1,pH值5.4,光照时间12 h.d-1,光照强度1400μmol·m-2·s-1,培养温度25±1℃。实验结果表明,外植体在丛生芽诱导培养基中培养27天,生长速率达到6.4 g·L-1·d-1,获得大量性状均一的丛生芽。获得再生植株的培养条件为:B5+NAA 0.2 mg·L-1+6-BA 2.0 mg·L-1+蔗糖20g·L-1+活性炭2.0 g·L-1+琼脂6.0 g·L-1,pH值5.8,光照时间12 h·d-1,光照强度1400μmol·m-2·s-1,培养温度25±1℃。实验结果表明,外植体在成苗培养基中培养56天后,植株高度达到3-4cm,每个植株具有4-5片叶,根3-4条,此时试管苗的可用于移栽。研究结果表明,试管苗在木屑+珍珠岩+腐殖土(1:1:1)的栽培基质中成活率达到94%。移栽初期PLA.PPO.PDO三种酶活性均有不同程度的升高,12天后趋于稳定。同时将移栽植株进行显微观察,植株并未发生形态上的改变,证明了采用组织培养方法获得再生植株的可行性。从台湾金线莲栽培植株中分离出6种内生真菌,制成真菌诱导子加入培养基中,发现真菌诱导子AF5对台湾金线莲生物量和总黄酮含量的累积具有显著地促进作用。根据植株的生长曲线选择在对数生长后期即培养第9周开始加真菌诱导子AF5,最适添加浓度为200 mL.L-1。初步药理实验研究表明,经过代谢调控后的台湾金线莲试管苗的乙醇提取物,在灌胃给药剂量为6.0 g·kg-1和12.0 g·kg-1时,对醋酸所致小鼠扭体反应有显著的抑制作用。将乙醇提取物用不同极性的有机溶剂进行萃取,考察不同萃取部位对醋酸致小鼠扭体反应的影响,正丁醇部位和乙酸乙酯部位在给药量为6.0 g·kg-1时,能够显著降低醋酸所致小鼠扭体次数,正丁醇部位的效果优于乙酸乙酯部位。研究结果提示,台湾金线莲具有显著的镇痛作用。
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