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近年来,活性氧和自由基研究成为现代生命科学的前沿和热点,评价和筛选具有强抗氧化活性的天然产物已成为生物学、医学和食品科学研究的新趋势。树莓叶中含有大量的黄酮类化合物,是开发天然抗氧化剂的重要来源。本文以这些作为废弃物的树莓叶为原料,研究了树莓叶中黄酮类物质的提取工艺及不同预处理方法、不同溶剂提取和不同采摘季节对黄酮得率的影响,针对不同预处理方法、不同季节、不同溶剂和不同提取方法树莓叶提取物,采用化学体系产生自由基和脂质过氧化体系,研究其清除自由基和抑制脂质过氧化的能力,采用具有工业应用价值的树脂法研究了树莓叶黄酮的纯化工艺,在此基础上研究了树莓叶黄酮纯化前后抗氧化性。结果如下:
⑴树莓叶黄酮提取工艺。回流法提取树莓叶黄酮优化条件为:以80%的乙醇为提取溶剂,提取温度90℃,提取时间1h,料液比1:25,在此条件下黄酮类物质的得率为3.95%;超声波提取树莓叶黄酮优化条件为:以60%的乙醇为提取溶剂,提取温度60℃,提取时间为50min,料液比1:25,在此条件下黄酮类物质的得率达到5.72%;微波提取树莓叶黄酮优化条件为:以50%的乙醇为提取溶剂,提取时间为5min,料液比为1:30,功率300W,在此条件下黄酮类物质的得率达到6.12%。不同预处理方法、不同季节和不同溶剂提取物中黄酮含量不同,经烫后冷冻干燥处理的提取物中黄酮含量高于其他预处理方法;八月份提取物黄酮含量高于其他月份;甲醇提取物黄酮含量高于其他溶剂提取物。比较三种不同提取方法,微波提取黄酮得率最高,且大大缩短提取时间,因此认为用微波提取较好,本试验以后均采用微波提取。
⑵树莓叶黄酮抗氧化性研究。测定不同预处理方法、不同季节、不同溶剂和不同提取方法提取物抗氧化性,清除自由基和抑制脂质过氧化的能力依次为:烫后真空冷冻干燥>直接真空冷冻干燥>烫后烘箱干燥>直接烘箱干燥;八月份>七月份>九月份>十月份;甲醇提取物>乙醇提取物>丙酮提取物>乙酸乙酯提取物;微波提取>超声波提取>回流提取。
⑶树莓叶黄酮纯化工艺及纯化前后抗氧化性。比较AB-8、NKA-9和X-5三种树脂,结果表明AB-8具有较高的吸附量和解吸率,分别为20.44mg/g和86.51%。树莓叶纯化工艺优化条件为:选用AB-8树脂为吸附剂,上样液pH为4~5,上样液流速为1ml/min,上样液浓度为1.2~1.6mg/ml,洗脱流速为1.5ml/min,洗脱剂乙醇的浓度为60%~70%,纯化前粗提液中黄酮纯度为7.95%,纯化后产品纯度为30.46%。树莓叶提取物经过纯化后,抗氧化能力明显上升,当黄酮加入量为200ug时,DPPH自由基的清除率上升27.17%,·OH的清除率上升21.45%,脂质过氧化抑制率上升26.72%。
⑷比较了三种提取方法的提取效果,研究了三种提取方法的优化条件,优化了AB-8树脂纯化工艺,研究了树莓叶黄酮提取液抗氧化活性,本论文可以为相关的研究提供一定的依据,在药物及食品新资源的开发上都具有一定的理论和现实意义。