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百合是多年生球根花卉，属于单子叶植物，具有较高的经济价值和观赏价值，现已成为世界上最重要的鲜切花之一。植物分子生物学的迅速发展，为改良植物品质和性状提供了全新的途径，利用转基因的手段改良百合性状和品质变得切实可行。农杆菌作为遗传转化载体成本低廉、转化率较高，是应用最广泛的外源基因导入法。但是百合是单子叶植物，对农杆菌具有不敏感性，所以要探索有效途径提高农杆菌介导百合转化率。本实验以麝香百合的愈伤组织为转化材料，以pBI121（无外源基因）为转化载体，研究农杆菌介导的麝香百合转化方法，为麝香百合的遗传转化打下基础。1．建立高频再生体系百合再生植株小鳞片和百合花丝均能诱导出大量愈伤组织，且愈伤组织分化率都比较高，所以将二者进行比较，选择最佳受体材料。小鳞片在激素浓度为6-BA 0.5mg／L，NAA0.1mg／L时再生小植株小鳞片的愈伤形成率最高，达到90％；而花丝在激素浓度为6-BA1.0mg／L，NAA 0.5mg／L愈伤形成率最高，达到86.3％，所以，再生苗小鳞片的愈伤形成能力要比花丝强。小鳞片在激素浓度为6-BA 0.5 mg／L，NAA 0.05 mg／L时愈伤组织分化率最高，达到93.8％；而花丝在激素浓度为6-BA1.0mg／L，NAA 0.2mg／L时，花丝愈伤组织分化率最高，达到85.0％。所以，再生苗小鳞片的愈伤分化能力要比花丝强。再生苗小鳞片的愈伤组织形成能力和分化能力都要比花丝高，而且不受季节的影响，随时可以取材，所以最后选择再生植株小鳞片作为外植体。2．抗生素筛选压的确定从外植体的卡那霉素（Km）抗性筛选和头孢霉素（Cef）抑菌试验可知，小鳞片愈伤组织块在Km125mg／L的浓度下分化率为2.5％，是亚致死浓度，适合作为小鳞片愈伤组织抗性筛选压；当生根培养基中Km为125mg／L时，鳞茎叶开始变黄，不再有根生成，该浓度也适合作为筛选转化植株生根的临界浓度。Cef的浓度为400mg／L时抑菌而不伤害外植体，可做为抑菌浓度。3．影响转化率的因素随着共培养基中NH4NO3浓度的降低，农杆菌的转化率升高，当共培养基中完全去除NH4NO3，瞬时表达最高，可达到60％，所以共培养基选择无NH4NO3的MS培养基。以MS（pH5.8）为侵染液时转化率为61.3％，以YEB（pH7.0）为侵染液时转化率为16.3％，前者远远高于后者，所以选择MS为侵染液。菌液浓度过低、侵染时间过短则农杆菌对愈伤组织的侵染不够充分，浓度过高、侵染时间过长则对愈伤组织块有毒害作用，在OD600=0.6时侵染浓度最佳，侵染时间为8min时转化率最高。共培养时间低于16h，菌株不能诱发肿瘤，但是共培养时间太长，会由于农杆菌的过度生长，而使百合细胞受毒害而死亡，小鳞片愈伤组织与菌株的最佳共培养时间为3d。乙酰丁香酮（AS）有三种用法，一是在侵染液中加入，二是在共培养基中加入，三是侵染液和共培养基中都加入。在侵染液和共培养基中都添加AS获得最高的遗传转化率。