海绵胶煤炱菌非靶向代谢组学分析及多糖的生物活性研究

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海绵胶煤炱菌是煤炱菌科胶煤炱菌属的真菌,又名竹燕窝、竹花、竹菌,其营养素含量丰富,具有一定的食药用价值,在日常生活中受到消费群体的喜爱。海绵胶煤炱菌中的活性物质具有抗氧化、抑菌、抗肿瘤等生理活性。现阶段海绵胶煤炱菌还未实现大规模人工栽培,市面上开发的产品均为野生资源,因此其开发前景巨大。本研究通过LC-MS分析海绵胶煤炱菌五个不同生长时期代谢物的动态变化,筛选出各生长阶段差异代谢物及其代谢途径,并通过主成分分析、正交偏最小二乘法、代谢热图分析、KEGG注释、代谢通路分析等非靶向代谢组学研究,分析其在生长发育过程中的代谢物质的差异及相关代谢通路的变化,为海绵胶煤炱菌的开发利用提供研究依据。目前关于海绵胶煤炱菌多糖提取工艺、多糖生物活性、多糖精深加工产品等的方面研究较少,针对此问题本研究主要探究海绵胶煤炱菌多糖的提取工艺、多糖的生物活性以及多糖开发的产品,提高了海绵胶煤炱菌的综合利用价值。主要结论如下:1.通过Vanquish液相色谱和Q Exactive Focus高分辨质谱对海绵胶煤炱菌五个不同生长阶段30个样本进行非靶向代谢组学研究,鉴定出291种代谢物质,78种代谢通路,通过研究发现S1与S2含量存在显著差异代谢物有137个,覆盖45条代谢途径;S2与S3含量存在显著差异代谢物有138个,覆盖41条代谢途径;S3与S4含量存在显著差异代谢物有161个,覆盖48条代谢途径;S4与S5含量存在显著差异代谢物有142个,覆盖45条代谢途径。在整个海绵胶煤炱菌生长期间差异代谢物有89个,覆盖38条代谢途径。通过非靶向代谢组研究筛选出的差异化合物中具有生物活性的是海藻糖、肌肽、龙胆酸、亚精胺、烟酰胺核糖、抗坏血酸、辣椒素、角鲨烯、阿卡地新、原儿茶酸,这为进一步研究海绵胶煤炱菌的生物活性提供了基础。2.采用响应面法对海绵胶煤炱菌多糖热水浸提工艺进行优化,工艺优化发现海绵胶煤炱菌多糖最优提取条件为提取温度95.06℃、料液比1:41.37 g/m L、提取时间183.89min,预测多糖得率48.6952%。实际实验测得多糖得率为48.0128%,结果与模型预测值较为相近,因此响应面优化工艺可用于海绵胶煤炱菌子实体多糖的提取。3.通过对海绵胶煤炱菌多糖进行组分分析和体外抗氧化实验,实验结果表明多糖主要由葡萄糖、核糖、甘露糖、半乳糖、氨基葡萄糖、木糖、阿拉伯糖组成,体外抗氧化实验发现海绵胶煤炱菌多糖对DPPH、·OH、ABTS都具有一定的清除能力,当多糖浓度为2.5 mg/m L对·OH的清除率为89.507%,当多糖浓度为3 mg/m L时,对DPPH自由基的清除率为91.69%,当多糖浓度为5 mg/m L时,对ABTS自由基的清除率为90.31%。本实验证明了海绵胶煤炱菌多糖是一种天然的抗氧化资源,可以进一步研究海绵胶煤炱菌多糖体内抗氧化活性及多糖的其他生物活性。4.通过研究海绵胶煤炱菌多糖绿茶饮料,得到感官评价得分最高工艺为:混合粉为4 g,白砂糖为8 g,柠檬酸为0.01 g,β-环糊精为0.01 g。按照料液比1:150进行冲泡可得到色泽呈黄绿色,茶香清雅的饮料。
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