养羊业是我国畜牧产业经济发展的重要组成部分,其繁殖力、羔羊出生率等直接关系到牧民的经济收入。为了畜牧业的发展,越来越多的核移植、胚胎移植等技术早已应用到生产实践上来,但这些技术的发展又存在胚胎着床率低下的问题,是一个复杂的生理过程,也是妊娠建立的一个关键环节。TLR4是近几年研究次数最频繁、领域最广泛的基因,与LPS配体结合能够激活TLR4信号传导通路,引起下游各种炎症因子与激素的释放,并能够相互作用调控细胞的许多功能,可能涉及哺乳动物胚胎附植,所以有关胚胎附植基因表达的研究也成为了热点。目的:本实验通过研究TLR4在绵羊胚胎附植期子宫内膜上的表达模式,从细胞水平上验证TLR4对附植的影响机制,为提高胚胎附植率提供借鉴。方法:本实验首先运用半定量RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR分别检测21 d妊娠绵羊全身组织和妊娠第9 d、13 d、17 d、21 d、25 d绵羊子宫内膜组织中TLR4基因的表达。其次,通过免疫组织化学和细胞免疫学抗体着色法检测TLR4蛋白在早期妊娠绵羊（9 d、13 d、17 d、21 d、25 d）子宫组织中的分布与表达,并利用VIM蛋白特异性检测基质细胞的完整性。最后,进行构建pcDNA3.1（+）-TLR4真核表达载体,用1μg·L^-1的LPS刺激转染后的子宫内膜基质细胞,建立内膜基质细胞炎症模型。利用荧光定量RT-PCR技术和蛋白质免疫印迹Western Blot方法检测受LPS刺激后的内膜基质细胞TLR4 mRNA表达量和TLR4蛋白表达量以及免疫因子IL-1β和IL-6的mRNA表达水平。结果:不仅发现TLR4基因在绵羊全身组织的输卵管、卵巢、子宫、膀胱、脾脏及松果体中表达量较高,在肝脏、小肠、肌肉中表达较弱,而在心脏、垂体、脂肪等组织中不表达,而且TLR4基因在子宫内膜中的表达量从第9 d开始下降至附植点第17 d最低,之后上升到第25 d达到峰值。此外,TLR4基因不管是在中国美利奴羊还是在湖羊子宫内膜组织中检测,其黄体期的表达水平均显著高于卵泡期（P<0.05）。其次,TLR4蛋白在子宫内膜各部位均有表达,呈一定的动态时空模式,且在第17 d的基质细胞中表达尤为显著,并鉴定出基质细胞的完整性。最后成功构建pcDNA3.1（+）-TLR4真核表达载体,并且发现LPS不仅降低了细胞中IL-6的表达,增加了IL-1β的表达,引起炎症反应,使Th1/Th2偏向不利于妊娠的Th1方向,而且TLR4 mRNA表达量在12 h、24 h、48 h、72h显著高于对照组（P<0.05）,其中48 h的表达极显著（P<0.01）,TLR4蛋白表达量也始终高于对照组,与定量结果一致。结论:TLR4的表达具有组织特异性,且在绵羊胚胎附植期及发情周期的子宫内膜中呈现一定规律,提示TLR4在绵羊繁殖期发挥一定作用。发现TLR4蛋白在胚胎附植早期子宫内膜中的表达模式。LPS有效激活了子宫内膜细胞中TLR4信号通路;子宫蜕膜组织TLR4受体蛋白对胚胎附植早期妊娠微环境的平衡维持起重要作用。