拟南芥ag-10表型增强突变体的筛选与分析

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在植物花发育过程中,花分生组织中的干细胞是有限的,一旦分化产生全部花器官原基就会失去干细胞活性,这意味着花干细胞维持被精确终止,不再具有干细胞的功能。花干细胞维持的终止包括两类关键转录因子,WUSCHEL(WUS)和AGAMOUS(AG)。WUS特异地在花分生组织的组织中心表达,它的存在使其上方细胞具有干细胞的特征,维持着花干细胞的活性。AG能通过直接和间接的方式负调控WUS的表达,终止花干细胞的活性。花干细胞发育过程中WUS表达的精确维持与终止是十分复杂的过程,目前其调控机制仍不十分清楚。本研究以具有花干细胞发育具有轻微缺陷的拟南芥弱突变体ag-10为材料,通过EMS诱变,筛选具有花干细胞发育缺陷表型增强的突变体,进而通过将图位克隆与基因组重测序相结合的方法,分离突变基因;通过引入pWUS:GUS报告基因,来显示内源WUS表达情况,以确定该基因是否为时间调控WUS表达所必需。主要研究结果如下:1.通过对ag-10进行诱变筛选,分离获得了agen7,agen446,agen350,agen358, agen140,agen63,agen317,agen475,agen377,agen90等表型明显的突变体。在形态上均表现出果荚较ag-10明显膨大,且变短变粗,表明在花干细胞发育调控上有严重的缺陷。2.对突变体agen7进行了基因定位与分析,结果显示:该突变体为单基因隐性突变,突变基因位于四号染色体,并初步确定了3个候选基因,分别为AT4G20910、AT4G16280.AT4G29010.3.对突变体agen446进行了基因定位与分析,结果显示:该突变体为稳定的单基因隐性遗传,筛选到了其单突变体S446。将agen446突变基因定位在第三号染色体上的分子标记MGL6(1)与KIG2之间的区间内。GUS染色及石蜡切片结果显示agen446中WUS在花发育第9期仍有表达,表明该基因的突变明显延长WUS的表达时期,说明花干细胞活性的精确终止受到影响。4.对突变体agen317与agen358的突变基因进行了初定位,结果显示:agen317定位在3号染色体上,agen358定位在5号染色体。
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