松木层孔菌活性成分提取与分析

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松木层孔菌(Phellinus pini)是一种大型白腐真菌,隶属于担子菌亚门,层菌纲,非褶菌目,多孔菌科,针层孔菌属。近几十年来的研究表明层孔菌属普遍具有较好的生物学活性,如抗肿瘤、抗氧化、抗病毒等。但是对于松木层孔菌的研究还较少,本论文可为其进一步的医药保健食品开发提供参考依据。(1)首先研究了微波提取松木层孔菌多糖和多酚工艺条件的优化。采用单因素和响应面实验,研究结果得到微波提取松木层孔菌多糖的最佳工艺条件为:料液比为1:40,提取温度为92℃,提取时间为60 min,在此条件下得到的多糖提取率为3.33%;得出微波提取松木层孔菌多酚的最佳工艺条件为:料液比为1:20,乙醇浓度为55%,提取温度为42℃,提取时间为42 min,在此条件下得到的多酚提取率为 3.987%。(2)对优化条件下提取的多糖和多酚进行了体外抗氧化活性和抑制a-葡萄糖苷酶活性的研究,结果发现多糖和多酚在一定的浓度范围内,都具有一定的体外抗氧化活性和a-葡萄糖苷酶抑制活性。松木层孔菌多糖和多酚对DPPH的半清除浓度(EC50)分别为2.59、1.03mg/mL,对 ABTS 的半清除浓度(EC50)分别为 6.44、2.26mg/mL,总抗氧化能力分别为0.27、0.13mmolFeSO4/mg。a-糖苷酶抑制活性研究表明,松木层孔菌多糖和多酚对a-糖苷酶的半抑制浓度(IC50)值依次为0.15、2.17mg/mL,均低于阳性对照阿卡波糖的4.26mg/mL。(3)在最优条件下提取的松木层孔菌多糖,经乙醇分级沉淀,得到粗多糖。选取60%醇沉粗多糖经DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和Sephacryl S系列凝胶柱层析获得多糖组分PHP60A和PHP60B1,高效液相检测为均一组分,测得分子量分别为:88.9KDa和178.6 kDa。PHP60A和PHP60B1通过单糖组成分析,得出:PHP60A和PHP60B1主要由三种单糖构成:甘露糖、半乳糖和葡萄糖,摩尔比分别为0.86:4.89:1.00和0.74:4.53:1.00。
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