【摘 要】
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DNA异常甲基化是癌症发生的重要早期事件,肿瘤相关基因启动子的甲基化水平已成为癌症诊断和预后观察的重要依据。目前DNA甲基化检测技术如甲基化敏感的高分辨率熔融曲线、亚硫酸氢盐测序等,需要复杂且昂贵的仪器及繁琐的操作,阻碍了其在基层医疗机构的应用。因此,迫切需要开发便携、灵敏、适宜的策略针对特定癌症相关基因进行甲基化检测,以满足精准医疗的普及。在本研究中,我们建立了基于金磁微粒免疫层析系统的位点特异
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DNA异常甲基化是癌症发生的重要早期事件,肿瘤相关基因启动子的甲基化水平已成为癌症诊断和预后观察的重要依据。目前DNA甲基化检测技术如甲基化敏感的高分辨率熔融曲线、亚硫酸氢盐测序等,需要复杂且昂贵的仪器及繁琐的操作,阻碍了其在基层医疗机构的应用。因此,迫切需要开发便携、灵敏、适宜的策略针对特定癌症相关基因进行甲基化检测,以满足精准医疗的普及。在本研究中,我们建立了基于金磁微粒免疫层析系统的位点特异性DNA甲基化检测方法。在设计策略上,将突变扩增阻滞系统引入甲基化特异性引物组的设计中,通过一对平行的PCR扩增反应实现对目的Cp G位点甲基化模式的检测。通过将生物标记的寡核苷酸片段引入PCR,该检测系统可以通过层析装置识别并捕获扩增子以实现对结果的判读。金磁微粒作为免疫层析系统的信号探针,其光学特性可以使我们在5分钟内用肉眼读取检测结果,避免了PCR后使用复杂和昂贵的设备以及繁琐的操作步骤。另外,由于金磁微粒具有超顺磁性,可以通过磁定量检测仪自动读取检测结果,实现数字化判读。由于甲基化特异性引物组的引入,0.1%的目标胞嘧啶-鸟嘌呤二核苷酸位点在强干扰背景的情况下可被准确区分。另外,亚硫酸氢盐处理之后,通过目视化判读或磁信号分析均可在90分钟内区分低至0.01 pg的重组DNA。miR-34a作为一种重要的抑癌基因,其启动子甲基化状态通过细胞系以及临床样本进行了验证,显示出该检测系统在癌症诊断和预后方面的巨大潜力。
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