【摘 要】
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随着人们对疾病预防意识的提高,体外诊断关口前移成为趋势,即疾病早期诊断越来越趋向于社区化管理甚至推崇家庭自检。因此一种快速便捷的疾病检测适宜技术需求迫切,对预防为主的“健康中国”发展有着一定的意义。本研究基于金磁微粒层析系统结合环介导等温扩增（LAMP）建立了一种直扩快速的核酸检测方法即“Direct UDG-LAMP-金磁微粒层析法”。该技术可同时实现基因多态性SNP及病原微生物核酸检测,并在该
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随着人们对疾病预防意识的提高,体外诊断关口前移成为趋势,即疾病早期诊断越来越趋向于社区化管理甚至推崇家庭自检。因此一种快速便捷的疾病检测适宜技术需求迫切,对预防为主的“健康中国”发展有着一定的意义。本研究基于金磁微粒层析系统结合环介导等温扩增（LAMP）建立了一种直扩快速的核酸检测方法即“Direct UDG-LAMP-金磁微粒层析法”。该技术可同时实现基因多态性SNP及病原微生物核酸检测,并在该技术中引入了防污染系统。该检测技术首先以MTHFR C677T基因多态性SNP位点的为检测目标,建立全血、口腔拭子多样本类型直扩检测技术,再通过体系设计,攻克环介导等温高效扩增但易污染的技术瓶颈问题,引入UDG防污染系统,最后经过系统的性能评估分析该检测技术的稳定性及有效性,该技术可以在约25min完成检测,灵敏度可达到0.16ng/μL全血。基于该检测技术本论文以新型冠状病毒的保守区域ORF位点及N蛋白基因位点建立了病原微生物核酸快速检测方法。该方法可在约25min完成病毒的检测,并对体系进行了优化,选用假病毒和国家标准品对灵敏度进行了验证,检测灵敏度可达到100copies?m L。同时也采用不同类型的冠状假病毒（MERS,SARS）为模板进行特异性的性能评估,结果表明该检测方法具有良好的特异性。最后论文通过对MTHFR C677T基因进行临床样本的检测以分析“Direct UDGLAMP-金磁微粒层析法”核酸检测技术的可行性。论文中收集300例临床样本,其中包括200例全血,100例口腔拭子,并采用测序作为金标准进行对比分析,检测结果的一致率为100%,表明该检测技术具有很好的适用性及可靠性。该检测技术可实现核酸免提取,且高灵敏度,耗时短,操作简单便捷,为医护点检测甚至未来的家庭自检提供一种新的选择。
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