三角褐指藻3-磷酸甘油脱氢酶的克隆及功能分析

来源 :暨南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:adzqx2009
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
微藻作为极具前景的生物柴油新原料,通过基因工程手段进一步增加其脂质的积累量是当前微藻产油的重要课题。3-磷酸甘油脱氢酶催化糖酵解中产生的二羟丙酮磷酸向3-磷酸甘油转化,本研究通过实现三角褐指藻的3-磷酸甘油脱氢酶基因的转基因表达,尝试对能源微藻进行分子设计育种。首先克隆了3-磷酸甘油脱氢酶基因,与带有氯霉素乙酞转移酶(Chloramphenicol Acetyltransferase,CAT)筛选标记的表达载体pHY18连接,转化至三角褐指藻。对转化藻进行氯霉素抗性筛选,对基因组DNA的PCR来验证其基因整合。通过荧光实时定量PCR和Western blot确认重组的3-磷酸甘油脱氢酶基因在mRNA及蛋白表达水平上均获得了表达。通过尼罗红荧光染色测定中性脂,结果表明脂质相对于对照组是增加的,而气质色谱联用测得脂肪酸组分中的16碳及18碳脂肪酸含量明显上升。转化藻株细胞内的3-磷酸甘油浓度是对照藻株的6.7倍。说明3-磷酸甘油脱氢酶的重组表达(过表达)促进了糖酵解的中间产物二羟丙酮磷酸向3-磷酸甘油催化。本研究结果表明所克隆的3-磷酸甘油脱氢酶基因对藻的甘油合成、脂质含量及脂肪酸成分均有显著影响。结果也提示对三角褐指藻3-磷酸甘油脱氢酶的同工酶需要进行比较研究,确定其它同工酶是否对脂质积累有促进作用。
其他文献
本文主要讨论了Lorentzian空间形式中类空超曲面的高阶脐性,在一定条件下刻画了超曲面Mn的一些k-脐特征及对r-牛顿算子的应用.论文共分为三部分:第一部分,主要介绍了Lorentzia
学位
真空预压过程中真空压力随深度的增加而减小,真空吸力减小,将会导致深层软土加固效果欠佳,可能会引起不均匀的固结等工程问题。基于此,文本开展了真空预压室内试验,探究了真空预压新方法,该方法主要是通过注气的方式使得深层土层产生裂纹劈裂,加速土体的固结。许多专家学者采用室内试验、理论分析方法和数值方法,致力于研究排水板真空压力的分布、水平变形和沉降演化规律、孔隙水压力变化规律以及真空预压过程中的不排水抗剪
信息时代,信息技术的不断发展,使得传统版权逐渐向数字化方向靠拢,数字版权应运而生且发挥着日益重要的作用,但技术的进步也使得侵权盗版资源的复制与传播变得更加简单快捷,数字版权保护陷入困境。与此同时,区块链技术基于其独特的技术优势为数字版权保护带来了难得的机遇。基于区块链技术的数字版权保护是我国数字版权发展的内在需求,传统数字版权管理模式下,版权登记成本高、耗时长、过程也稍显繁琐,数字版权保护力度跟不
蛋白质分类问题作为蛋白质组学研究中的一个重要分支,近些年已吸引了越来越多研究者的关注。对蛋白质相关分类问题的研究是全面掌握蛋白质结构及功能的前提与基础,也在细胞生物
在蛋白质相互作用网络中,识别蛋白质复合物对预测蛋白质相互作用、解释特定的生物进程、揭示蛋白质功能、推断物种蛋白质相互作用网络进化、对于复杂疾病的研究具有十分重要的
新时代背景下,我国社会主要矛盾已经转化为人民日益增长的美好生活需要和不平衡不充分发展之间的矛盾。这导致了公众对政府的行政管理水平提出了更多、更高的要求。而基层公
壳聚糖酶是一种降解壳聚糖的专一性水解酶,可用于制备功能性的壳寡糖。本研究立足于从海洋微生物中寻找高活性壳聚糖酶来源,以期对酶法制备壳寡糖的规模化生产及应用研究提供实
2-苯乙醇作为一种芳香醇广泛应用于食品、烟草、化妆品和日化用品等行业中。由化工途径制备的2-苯乙醇因原材料的致癌性和人们对健康理念的更新,人们开始寻求一种新的、无污染
在过去的几年中,以余额宝、P2P等形态为代表的互联网金融业务得到了长足的发展,以2009年3月第一家P2P公司红岭创投的成立作为行业发展的起点,行业发展已经进入第八个年头。从