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目的:我们团队的前期研究发现癫痫患者及大鼠模型中ZAG表达降低,ZAG具有抑制癫痫的作用。胰岛素和过表达ZAG均可抑制癫痫发作和异常放电,既往研究发现ZAG可影响多种组织的胰岛素敏感性,但胰岛素是否调节ZAG的表达目前尚不清楚。癫痫中,氧化应激发挥了重要作用,而胰岛素和ZAG在多种疾病中均与氧化应激损害有关,但癫痫中ZAG是否具有抗氧化应激作用尚不清楚。本研究拟探讨胰岛素对原代培养皮层神经元中ZAG表达的影响及其机制,并探索胰岛素和ZAG在癫痫诱导的氧化应激中的作用。方法:1.提取并培养大鼠原代皮层神经元,用免疫荧光双标技术检测神经元中ZAG的表达;2.用不同浓度（0nM、10nM、50nM、100nM、200nM、500nM）的胰岛素干预皮层神经元,用MTS法测定不同浓度胰岛素对神经元活性影响,用RT-qPCR、Western blot测定不同浓度胰岛素干预条件下神经元中AZGP1 mRNA和ZAG表达量的变化,并通过AXL1717（IGF-1R拮抗剂）和BMS-754807（IR和IGF-1R拮抗剂）干预进一步探讨其作用机制;3.建立无镁细胞外液培养神经元癫痫模型,运用RT-qPCR、Western blot方法测定癫痫模型中AZGP1 mRNA和ZAG蛋白表达量的变化;4.验证LV的转染效果:将原代皮层神经元分为四个组分别转染慢病毒:过表达空载体组（Vector）、过表达组（LV-AZGP1）、低表达空载体组（LV-RNAi-Vector）、低表达组（LV-RNAi）。运用激光共聚焦显微镜观察、RT-qPCR及Western blot方法检测慢病毒转染效果;5.探索胰岛素及ZAG在癫痫诱导的氧化应激中的作用机制:将培养的神经元随机分为八个组,分别给予不同的处理:空白对照组（Control）、癫痫组（Seizure）、过表达空载体组（Vector）、过表达组（LV-AZGP1）、低表达空载体组（LV-RNAi-Vector）、低表达组（LV-RNAi）、胰岛素组（Insulin）、胰岛素+低表达组（Insulin+LV-RNAi）。激光共聚焦下观察超氧阴离子(O2-)的水平并统计。结果:1.免疫荧光结果显示ZAG在原代皮层神经元中有表达;2.MTS结果显示低于200nM的胰岛素处理对神经元的活性无影响,但500nM的胰岛素降低了神经元的活性（P<0.05）。RT-qPCR和Western blot结果分别显示当浓度≤200nM时,胰岛素会增加神经元中AZGP1mRNA及ZAG水平,在200nM作用最明显。AXL1717或BMS-754807处理均可抑制胰岛素诱导的ZAG升高;3.RT-qPCR和Western blot结果分别显示在无镁癫痫模型中AZGP1mRNA及ZAG水平较对照组明显降低（P<0.01）;4.原代皮层神经元转染慢病毒后,绿色荧光结果显示神经元慢病毒转染成功,RT-qPCR及Western blot结果显示,与相应对照组相比,过表达组AZGP1 mRNA和ZAG在病毒转染72小时后显著增加（P<0.01）,低表达组AZGP1 mRNA和ZAG在病毒转染72小时后显著降低（P<0.01）;5.Seizure组超氧阴离子(O2-)产生增加,过表达AZGP1和胰岛素可减轻O2-的产生,低表达AZGP1可增加O2-的产生。与胰岛素组相比,Insulin+LV-RNAi组O2-的产生明显增加。结论:在原代皮层神经元中,胰岛素主要通过作用于IGF-1R诱导ZAG表达增加。在神经元癫痫模型中,胰岛素发挥抗氧化应激作用可能是通过增高ZAG水平实现的。