本实验以暗纹东方纯B淋巴细胞刺激因子(fBAFF)和γ-干扰素诱导的溶酶体巯基还原酶(fGILT)基因克隆、蛋白表达及蛋白生物活性检测为研究方法,旨在弄清楚它们的免疫作用及在进化上的地位。暗纹东方鲀B淋巴细胞刺激因子的克隆、表达和活性研究。B淋巴细胞刺激因子是对B细胞分化和存活起着重要作用的一种细胞因子。本研究中,暗纹东方纯的BAFF基因被鉴定。暗纹东方纯的BAFF开放阅读框为789个核苷酸序列并翻译成262个氨基酸。BAFF基因组结构有六个外显子和五个内含子组成,其基因组大小1.8kb。序列比对结果表明氨基酸序列拥有TNF特征：跨膜区、潜在的弗林酶切位点、三个半胱氨酸残基。预测的BAFF三维结构显示与人的三维结构很相似。实时定量PCR(Real-timePCR)分析显示fBAFF主要表达在暗纹东方鲀的脾脏中。SUMO-fsBAFF和GFP/fsBAFF在大肠杆菌Rosseta (DE3)中表达,并用镍柱纯化和SDS-PAGE、western blot分析。激光共聚焦直观的观察GFP/fsBAFF与小鼠B细胞的结合。体外MTT检测和流式细胞检测表明SUMO-fsBAFF能够促进暗纹东方纯脾细胞存活；SUMO-fsBAFF和anti-IgM共刺激促进小鼠脾脏B淋巴细胞的增值。这些结果表明BAFF在鱼类中是能够强化免疫应答的免疫因子。干扰素-γ诱导的溶酶体巯基还原酶(GILT)在MHCⅡ抗原呈递过程中的二硫键还原起着重要作用。在这项研究中,暗纹东方鲍GILT (fGILT)基因被鉴定。fGILT编码一个242个氨基酸的蛋白,分子量为26.7kDa,并且拥有GILT蛋白的特征性序列：CQHGX2ECX2NX4C. CXXC基序和C端5个半胱氨酸残基。基因组分析显示fGILT包括1836个核苷酸残基,其中外显子7个,内含子6个,并和人、小鼠的外显子-内含子结构相似。系统树分析显示fGILT位于脊椎动物分支,说明可能与其他脊椎动物GILT蛋白来源于同一个祖先。荧光实时定量PCR结果显示fGILT mRNA以组织特异性的形式表达,并且经过脂多糖(LPS)刺激后在脾脏和肾脏中显著上调。研究显示fGILT与细菌感染时的免疫应答有关。这也为人类疾病的动物模型提供了研究基础。