【摘 要】
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目的 过氧化物酶体增殖物激活受体-γ2(PPAR-γ2)是参与脂肪细胞分化的转录因子,属核受体家族,其基因定位于3p25.在多个种族的研究报道中发现PPAR-γ2外显子B 的Pro12Ala(CCA
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目的 过氧化物酶体增殖物激活受体-γ2(PPAR-γ2)是参与脂肪细胞分化的转录因子,属核受体家族,其基因定位于3p25.在多个种族的研究报道中发现PPAR-γ2外显子B 的Pro12Ala(CCA→GCA)多态性与T2DM或肥胖相关,为了研究该多态性与中国人群中2型糖尿病发病的关系,进行了该次实验,在2型糖尿病(T2DM)人群与正常人群中检测PPAR-γ2基因Pro12Ala多态性的基因分布,比较两组人群中基因频率的差异,从而确定该基因多态性与T2DM是否相关.方法 选择101例T2DM病人和104例正常人作为研究对象,进行BMI、空腹血糖及胰岛素测定,抽取外周血分离白细胞提取基因组DNA,PRC扩增包括Pro12Ala多态性的PPAR-γ2基因片段,其PCR产物与特定的酶共同孵育消化残余引物及dNTPs,然后在不同荧光素标记的两种Acyclo终止子及AcycloPolDNA聚合酶存在下进行TDI(template-directed dye-terminator incorporation)反应,即根据模板DNA的SNT位点碱基的变化,在3端紧邻SNP位点的引物末端加入不同种类的荧光素标记的Acyclo终止子(一种ddNTP衍生物),再利用荧光偏振技术(fluorescence polari-zation FP)辨别荧光素的加入及加入荧光素的种类,根据Victor2测定荧光偏振值确定PPAR-γ2基因Pro12Ala多态性的基因型.比较基因型及基因频率在两组中的差异,并按性别、BMI分层研究.结论 在中国汉族该研究人群中PPAR-γ2基因Pro12Ala多态性可能与T2DM发病无关联,与肥胖及胰岛素抵抗无明显关联,TDI-FP技术是一种较可靠的新型SNP技术,操作方便、相对经济,特异性及灵敏性均较高,可适用于复杂疾病易感基因的筛选.
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