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本课题研究分为两部分：第一部分以未抗病毒治疗的HIV/HBV合并感染者、HBV单一感染者为研究对象，分析了HIV/HBV合并感染者HBV全基因组序列的缺失突变特征，并初步分析了HBV PreS缺失突变与宿主免疫的关系；第二部分研究从准种的角度，以HIV/HBV合并感染、HIV单一感染纵向2年、5年临床治疗队列，HIV/HBV合并感染、HBV单一感染抗病毒前横断面队列为研究对象，通过分析HBV PreS缺失与纵向临床队列HAART2年、5年期间CD4+T细胞数、CD8+T细胞数、CD4/CD8比值的关系以及抗病毒前血浆中细胞因子尤其是单核巨噬细胞因子活化的关系，初步探讨HBV PreS缺失突变对HIV/HBV合并感染者免疫重建的影响及与宿主免疫的关系及可能机制，为临床治疗方案的优化和进一步的机制研究及新药开发提供理论依据。 第一部分 HIV/HBV合并感染者HBV全基因组序列缺失突变特征 研究目的： 分析HIV/HBV合并感染者HBV全基因组序列缺失突变特征，初步探讨HBV缺失突变与宿主抗病毒治疗前免疫的关系。 研究方法： 以前期广州市第八人民医院研究队列为基础,以未经抗病毒治疗的104例HBV单一感染者、159例HIV/HBV合并感染者为研究对象。采集患者抗病毒前外周静脉血，QIAamp DNA Mini Kit试剂盒(QIAGEN,GER)提取血浆HBV-DNA，PCR扩增后经1%的琼脂糖凝胶电泳分析，选取PCR扩增产物送英潍捷基(上海)贸易有限公司测序，ContigExpress进行序列拼接，BioEdit软件对拼接序列与GenBank的kEU579441.1(B基因型)、AJ748098.1(C基因型)野生株序列进行比对。COBAS全自动病毒载量检测系统检测HBV DNA载量；采用全自动生化分析仪自动检测血浆中ALT，AST。SPSS13.0进行统计学分析：计量资料符合正态性分布且方差齐，则多组间采用方差分析，两组间比较采用t检验，以均数±标准差((x)±s)表示大小；不符合正态分布或方差不齐采用秩和检验，以中位数M(Q25，Q75)表示集中趋势；定性资料采用卡方检验；(*)P＜0.05表示差异有统计学意义。 研究结果： 1.在159例HIV/HBV合并感染者中，有82例患者HBV全基因组序列扩增成功；在104例HBV单一感染者中，有51例患者HBV全基因组序列扩增成功； 2.在82例HIV/HBV合并感染患者中,有HBV全基因组序列缺失突变的患者13例；在51例HBV单一感染患者中，3例患者发生全基因组序列上的缺失突变；缺失形式皆为PreS缺失； 3.无论是HBV单一感染者，还是HIV/HBV合并感染者，HBV全基因组序列PreS缺失碱基数均为3的倍数，即以密码子形式缺失； 4.在82例HIV/HBV合并感染者中，有HBV全基因组序列PreS缺失突变的患者共13例，HBV PreS缺失突变率为15.85%；在51例HBV单一感染者中，仅3例患者发生全基因组序列上的HBV PreS缺失突变，HBV PreS缺失突变率仅为5.88%；HIV/HBV合并感染者HBV PreS缺失突变率高； 5.在13例HIV/HBV合并感染HBV PreS缺失突变患者中，发生HBV PreS1缺失突变的患者共5例，发生HBV PreS2的患者共10例，HBV PreS2缺失突变率显著高于HBV PreS1缺失突变率(P＜0.05)； 6.82例HIV/HBV合并感染者共有64例患者基线CD4+T细胞数＜100个/ul,发生HBV PreS缺失突变的患者共12例，HBV PreS缺失突变率为18.75%；47例基线CD4/CD8比值≤0.1的合并感染者中共有9例患者发生HBV PreS缺失突变，其HBV PreS缺失突变率为19.15%；在51例HBV单一感染患者中,HBV PreS缺失突变率仅为5.88%；基线CD4+T细胞数＜100个/ul、CD4/CD8比值≤0.1的HIV/HBV合并感染者PreS缺失突变率显著升高(P＜0.05)。 研究结论： HIV/HBV合并感染者PreS缺失突变率高于HBV单一感染者，且PreS缺失突变以Pre S2区为主,并与抗病毒治疗前宿主T细胞免疫状态相关。 第二部分 HBV PreS缺失突变对HIV/HBV合并感染者免疫重建的影响 研究目的： 探讨HBV前S缺失突变是否延缓HIV/HBV合并感染者免疫重建进程，并从病毒学与免疫学角度，初步探讨HBV PreS缺失突变与宿主免疫的关系及可能机制。 研究方法： 以前期广州市第八人民医院研究队列为基础，采集基线CD4+T细胞数＜200个/ul的23例HIV/HBV合并感染者、26例HIV单一感染者HAART前，HAART第1年，HAART第2年外周静脉血，建立2年纵向研究队列；采集基线CD4+T细胞数＜200个/ul的76例HIV/HBV合并感染者、57例HIV单一感染者HAART前，HAART第1年，HAART第2年，HAART第3年，HAART第4年，HAART第5年外周静脉血，建立5年纵向研究队列。选取基线CD4+T细胞数＜200个/ul的76例HIV/HBV合并感染者、25例HBV单一感染者抗病毒前血浆及18例健康对照者血浆，建立抗病毒前横断面研究队列。流式细胞仪(BD,USA)检测外周血CD4+T和CD8+T细胞数；QIAamp DNA Mini Kit试剂盒(QIAGEN,GER)提取血清HBV-DNA，PCR扩增HBV PreS片段后经1%的琼脂糖凝胶电泳分析，选取HBV PreS扩增阳性产物进行T-A克隆，挑选60个单克隆PCR后选取阳性克隆菌液送英潍捷基（上海）贸易有限公司测序，BioEdit软件对测序结果与来自GenBank的kEU579441.1（B基因型）、AJ748098.1（C基因型）野生株序列进行比对。ELISA法检测45例基线CD4+T细胞数＜200个/ul的HIV/HBV合并感染者、22例HBV单一感染者抗病毒前血浆及18例健康对照者血浆中sCD163，sCD14,IL-18,IP-10,sCD27,MCP-1水平；COBAS全自动病毒载量检测系统检测HBV DNA载量；全自动生化分析仪自动检测血浆中ALT，AST。SPSS13.0进行统计分析。计量资料符合正态性分布且方差齐，则多组间采用方差分析，两组间比较采用t检验，并用均数±标准差((x)±s)表示集中趋势；不符合正态分布或方差不齐采用秩和检验，以中位数M(Q25，Q75)表示集中趋势；定性资料采用卡方检验或Fisher精确检验；(*)P＜0.05表示差异有统计学意义。 研究结果： 1.在23例基线CD4+T细胞数＞200个/ul HIV/HBV合并感染者中，HBV PreS片段扩增成功的患者有22例；在76例基线CD4+T细胞数＜200个/ul的HIV/HBV合并感染者中，HBV PreS片段扩增成功的患者有54例。25例HBV单一感染者中，HBV PreS片段扩增成功的患者有22例； 2.在基线CD4+T细胞数＞200个/ul的22例HIV/HBV合并感染者和26例HIV单一感染者中,两组间CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4/CD8比值在HAART0W至96W无差异； 3.在基线CD4+T细胞数＞200个/ul的22例HIV/HBV合并感染者和26例HIV单一感染者中,HIV/HBV合并感染缺失组与HIV/HBV合并感染非缺失组、HIV单一感染组在HAART0W至96W CD4+T细胞数无差异；HIV/HBV合并感染缺失组CD8+T细胞数在HAART第48W和96W显著高于HIV/HBV合并感染非缺失组(P＜0.05)；HIV/HBV合并感染缺失组CD4/CD8比值在HAART第48W和96W显著低于HIV单一感染组； 4.在基线CD4+T细胞数＞200个/ul的22例HIV/HBV合并感染者和26例HIV单一感染者中,HIV/HBV合并感染PreS2缺失组CD4+T细胞数呈低于HIV/HBV合并感染PreS1缺失组、HIV单一感染组趋势；HIV/HBV合并感染PreS2缺失组CD8+T细胞在HAART第72W、96W呈高于HIV/HBV S1del组、HIV单一感染组趋势，CD4/CD8比值在HAART第72W、96W显著低于HIV单一感染组； 5.在基线CD4+T细胞数＜200个/ul的54例HIV/HBV合并感染者和57例HIV单一感染者中，HIV/HBV合并感染组与HIV单一感染组HAART5年期间CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4/CD8比值无差异； 研究结论： 1.HBV PreS缺失突变，尤其是HBV PreS2缺失突变与HIV/HBV合并感染者CD4+T细胞数量的恢复延缓相关，与HIV/HBV合并感染者CD8+T细胞水平较高、CD4/CD8比值的恢复延缓显著相关。提示：HBV PreS2缺失与HAART后HIV/HBV合并感染者的免疫重建延缓相关； 2.HBV PreS缺失突变，尤其是HBV PreS2缺失突变可能与HIV/HBV合并感染者抗病毒前血浆中sCD163、sCD14水平较高相关。提示：HBV PreS2缺失突变可能与HIV/HBV合并感染者单核巨噬细胞的异常免疫活化相关。