乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus，HBV)感染引起的肝炎、肝硬化、甚至肝癌严重危害人类健康，但迄今无有效的治疗方法。α伐干扰素(Ⅰ型干扰素)在临床用于治疗乙型肝炎已有20多年的应用历史，但是有效率只有30-40﹪。γ干扰素(Ⅱ型干扰素)则是一类主要在免疫细胞中合成、可通过免疫调节而发挥抗病毒效应的细胞因子。已有研究发现联合应用Ⅰ型和Ⅱ型干扰素可以上调ISGF3复合物的活性；也有研究报道联合用药可以增强对单纯疱疹病毒、丙型肝炎病毒、鼠肝炎病毒和SARS病毒复制的抑制作用。本课题组用I型和II型干扰素联合处理肝源性细胞(Huh7)也发现能够增强抑制乙型肝炎病毒复制。 为了探索联合应用干扰素增加抗病毒作用的机制，将人肝源性细胞(Huh7)分别用α和Y干扰素联合及单独处理6h后抽提细胞RNA，用基因芯片(HGU—133A，Affymetrix公司)进行实验，将杂交信号扫描后处理分析。根据已知的干扰素信号通路以及抗病毒蛋白，本实验将Log2C—MAX(Log2A,B)≥03c：联合应用IFN-a和IFN-7处理组与对照组的基因变化谱；A，B：单独应用IFN-a或IFN-y处理组与对照组的基因变化谱)的基因进行归类和分析。结果发现，与单独使用干扰素相比，联合处理组共有137个基因在早期得到了增强，其中20个基因与抗病毒／免疫相关，26个基因与信号通路相关，23个基因与RNA相关，15个与蛋白折叠和降解相关，24个与细胞凋亡黏附等相关。有意义的是，除了许多己知的干扰素信号通路基因(JAK2、STATl和STAT2等)和抗病毒基因(ISGl5、OASL和ISG20等)得到增强外，还发现许多未报道可被干扰素诱导基因(MAX、Bcl-G等)的表达也得到了增强。挑选了部分基因进行定量PCR验证，结果与芯片一致，证实基因表达谱结果的可靠性。 挑选部分联合诱导表达基因克隆入真核表达载体得pcDNA-MAX和pcDNA-UBE2L6质粒，分别与HBV复制型质粒共转染Huh-7细胞。结果发现MAX可抑制HBsAg和HBeAg的表达。MAX属于bHLHZ转录因子家族成员，可以形成同源二聚体或者异源二聚体，c-Myc必须通过E-box与MAX形成异源二聚体c-Myc-MAX从而激活细胞增殖和凋亡。其他的成员如Mad、Mxi—l和Mnt也可以与MAX形成异源二聚体对抗调节细胞周期。但是有关MAX蛋白在干扰素通路和抑制病毒复制方丽的研究尚未见报道。为了探讨MAX在干扰素抑制HBV中的作用，进一步将MAX蛋白表达质粒与HBV复制型质粒瞬时共转染肝细胞，检测其对HBV基因复制和表达的影响。结果显示：与空载质粒的对照组相比，当MAX蛋白表达质粒分别以0.125、0.25、0.5μg与0.5μgHBV复制型质粒共转染细胞时，细胞上清中HBsAg分别降低了19﹪、36﹪和61﹪，HBeAg分别降低了23﹪、37﹪和53﹪；抽提细胞内的HBVcoreparticleDNA，Real-timePCR检测发现HBVDNA分别降低了28﹪、52﹪和80﹪。当MAX转染剂量分别为1.25μg、2.5μg，HBV复制型质粒为5μg时，Southernblot实验结果显示coreparticle中HBVDNA分别下降了60﹪和65﹪。当MAX转染剂量分别为0．25μg、0.5μg、1μg，HBV复制型质粒为1μg时，HBVRNA在Northernblot实验中分别下降了30﹪、70﹪和80﹪。上述结果提示MAX蛋白可以抑制HBV蛋白的合成、基因的转录和复制。此外，对ISRE的活性检测提示发现MAX调节干扰素信号通路发挥抗病毒作用。 上述研究结果为进一步深入探讨联合应用干扰素增加抗病毒作用的机制打下了良好基础，发现的新的抗病毒作用的基因具有进一步开发成抗病毒制剂的潜能。