基于网络药理学探讨血必净注射液治疗急性胰腺炎的作用机制及临床疗效分析

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急性胰腺炎是由多因素参与、发病机制复杂的急性腹部疾病,其发生率在世界范围内持续增加。目前急性胰腺炎的发病率约为13/10万一45/10万之间,是消化系统疾病患者住院的常见原因。诱发急性胰腺炎的致病因素主要是胆源性疾病、过度饮酒、高甘油三酯血症、感染、暴饮暴食及胰腺肿瘤等。急性胰腺炎具有病程进展迅速、并发症多的特点,若未得到及时诊断和治疗,可进展为全身炎症反应综合征和多器官功能衰竭,甚至危及生命。目前尚无普遍认可的治疗急性胰腺炎的特效药物,可用的治疗措施多为支持治疗和对症治疗。因此,开发安全、有效的治疗急性胰腺炎的药物是当前医药科技工作者亟待解决的研究课题。血必净注射液是在“菌毒炎并治”和“三证三法”理论指导下研制而成的中药复方注射液。该组方由赤芍、红花、丹参、川芎和当归五味中药材组成,具有活血化瘀、通经活络、溃散内毒的功效,以及调控炎症反应,拮抗内毒素、改善微循环、抗氧化应激反应、调节免疫功能的作用。本研究旨通过临床资料回顾性研究评价血必净注射液辅助治疗急性胰腺炎的疗效情况,并通过网络药理学方法探讨血必净注射液治疗急性胰腺炎的潜在作用机制,最后建立体外细胞模型实验验证血必净注射液对部分相关靶点的作用,为临床治疗提供科学依据。本研究根据患者是否联合应用血必净注射液,将符合纳入标准的患者分为对照组和观察组。观察两组患者的血淀粉酶和白细胞水平、腹部症状缓解时间及住院天数的情况,得出这两组治疗方案的疗效差异。另外,通过TCMSP平台筛选出血必净注射液的活性成分及其作用靶点;通过OMIM、GeneCards数据库筛选出急性胰腺炎的疾病靶点;通过Venn分析得到药物—疾病共靶点,即血必净注射液治疗急性胰腺炎的潜在靶点;通过STRING平台构建PPI网络,筛选药物治疗的关键靶点;并通过METASCAPE在线平台对药物—疾病共靶点进行GO分析和KEGG通路富集分析,从而进行生物功能学解析。最后,以小鼠巨噬细胞RAW246.7细胞系为研究对象,LPS为刺激因子建立体外炎症模型,通过MTT实验考察血必净注射液的细胞毒性,Elisa实验检测细胞上清液TNF-α、IL-1β、IL-6的含量,采用RT-qPCR实验检测细胞炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA的表达;用NO试剂盒测定细胞分泌NO的含量。研究表明,血必净注射液联合基础治疗在降低急性胰腺炎患者的血淀粉酶、炎性指标(WBC计数、中性粒细胞百分比和CRP)及改善胃肠功能、住院天数方面均优于单纯基础治疗,对患者肝功能指标ALT、AST和GGT及肾功能指标Scr和BUN与单纯基础治疗组比较没有统计学差异,说明血必净注射液能够减轻患者的炎症反应,显著缩短临床症状缓解时间及住院天数,且对患者的肝、肾功能没有明显不良影响,在西药基础上联合血必净注射液治疗急性胰腺炎较单用西药治疗具有显著优势。网络药理学研究证明血必净注射液可通过多成分、多靶点、多通路治疗急性胰腺炎,具体可能是通过调节炎症和免疫应答、细胞生长、增殖和凋亡、脂质代谢平衡及钙相关信号通路等几个方面实现的,体现了中医药临床治疗的有效性及中医基础理论的正确性。体外研究显示血必净注射液在浓度5-20μL/mL范围内对RAW264.7细胞的活力无影响;血必净注射液可以显著抑制细胞上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6和NO的分泌,下调TNF-α、IL-1β和IL-6mRNA的表达,抑制LPS诱导的炎症反应。综上,血必净注射液具有抗炎作用并可能通过多成分、多靶点、多通路治疗急性胰腺炎,为急性胰腺炎的治疗和血必净注射液临床应用提供理论依据。
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