日本脑炎(JE)是一种广泛流行于亚洲和环太平洋地区的人兽共患传染病，它影响着人类的健康并危害着畜牧业，特别是养猪业的发展。其病原体日本脑炎病毒(JEV)是一种典型的虫媒病毒，蚊子在该病毒的传播过程中发挥着重要的作用。现已报道自然界中有60多种动物可感染JEV，其中多数物种感染病毒后没有明显的临床症状，只能检测到动物血清高水平的中和抗体。　　 1.JEV EDⅢ结构域蛋白的原核表达、多克隆抗体的制备与鉴定　　 JEV表面的囊膜蛋白（E蛋白）是该病毒的主要结构蛋白之一，该蛋白主要由3个结构域组成，其中结构域Ⅲ(E蛋白第312～411位氨基酸残基)独立地在病毒表面折叠成为免疫球蛋白样结构，为诱导产生中和抗体的重要区域。实验中采用原核表达系统融合表达pET-32a-EⅢ蛋白，经过Ni+柱纯化后多次免疫新西兰大白兔，制备兔抗JEV E蛋白多克隆抗体。间接ELISA结果表明，以原核表达的重组蛋白为抗原，检测该多克隆抗体血清的效价为1∶256000; Western-blot试验中，1∶1000倍稀释的多抗血清与1μg的重组蛋白反应，能够显示出明显的条带，与经过浓缩的JEV全病毒抗原反应显出一条分子量大小约为53KD（E蛋白）的目的条带;间接免疫荧光试验中，多克隆抗体与BHK-21细胞内的JEV反应，最后在细胞质内产生绿色免疫荧光，对照组无特异性荧光;空斑减少中和试验中，多抗血清的中和抗体效价为1∶160。表明制备的多克隆抗体与重组蛋白和JEV E蛋白都能发生良好反应，并且该多抗有较高水平的中和效价。　　 2.宠物犬感染JEV体内中和抗体动态变化研究　　 犬感染JEV，能检测到高阳性率和体内高水平的中和抗体在国外已有报道。宠物犬与人关系密切，将其作为哨兵动物来监测当地人受到JEV感染的风险性具有重要价值和意义。实验在上海某宠物医院采集了1年内各个月份不同年龄27个品种的宠物犬血液共253份，监测了在自然感染条件下其体内JEV中和抗体随流行季节的变化规律。总体中和抗体阳性率达到28.1％。不同季节间犬JE中和抗体水平差异显著，JEV流行季节（6-9月）之前和之后的三个月中和抗体阳性率分别为16.3％和43.4％，差异极显著(x2=14.432，p＜0.01)。犬的年龄间（小于一岁与大于1岁）中和抗体阳性率为24.1％和39.0％，差异显著(x2=5.633，p＜0.05)。而犬的性别间中和抗体阳性率无显著差异(x2=1.860，p＞0.05)。结果表明宠物犬在JE流行季节、自然感染条件下受到JEV感染的机率较高。　　 通过人工感染试验，两只比格犬分别于皮下和腹腔注射5×106和107pFU的 JEV(SH-JEV01)。在观察期的30天内，比格犬没有体温的明显升高，亦未出现任何临床症状。按时采集犬血液，分离血清，并检测JEV中和抗体效价，结果表明两只犬从第4天开始出现中和抗体，到第30天体内中和抗体达到较高水平。