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研究背景:病理性瘢痕是创伤后组织过度修复的结果,是临床常见疾病。常常以过度纤维化和胶原蛋白堆积,排列紊乱为主要病理学特征。病理性瘢痕包括增生性瘢痕和瘢痕疙瘩,瘢痕增生期常伴随瘙痒、疼痛,萎缩期又因瘢痕挛缩常影响美观和造成关节处功能障碍,给患者造成极大的身体和精神负担,是该领域目前研究的重难点。自噬是细胞的一种程序性死亡方式,对细胞内物质再利用及稳态维持至关重要。近年来不断有研究表明,自噬也可参与病理性瘢痕等纤维化病变形成。目前有研究指出病理性瘢痕中存在自噬水平上调,也有研究指出病理性瘢痕中自噬水平下调,但尚无统一定论。微小RNA(MicroRNA,miRNA)是一种非编码小分子RNA,在多种纤维性疾病中存在差异性表达。其中miR21与病理性瘢痕的发生发展密切相关,已有研究证明,miR21的上调与可促进胶原沉积加重纤维化进程。同时,miR21也被观察到参与自噬活化的关键环节,可在多种疾病中参与调控自噬水平。但目前病理性瘢痕中miR21可否调控自噬水平及其相关性尚无报道。因此本研究拟探讨病理性瘢痕中miR21与自噬相关因子P62,LC3的表达水平及相关性,旨在更深入地认识病理性瘢痕的发生机制。研究目的:1.明确病理性瘢痕组织及瘢痕成纤维细胞中miR21的表达水平;2.明确病理性瘢痕组织及瘢痕成纤维细胞中自噬相关因子LC3、P62的表达水平;3.明确病理性瘢痕中miR21与自噬相关因子LC3、P62的表达的相关性。研究方法:1.收集2017年11月至2018年12月在川北医学院附属医院烧伤整形外科行手术切除的瘢痕疙瘩组织、增生性瘢痕组织、正常皮肤组织各10例。提取组织总RNA,并逆转录为cDNA备用,应用实时荧光定量PCR检测miR21及自噬相关因子LC3、P62的mRNA表达水平。提取组织总蛋白质,应用Western Blot检测自噬相关因子LC3、P62的蛋白表达水平;2.分析瘢痕疙瘩及增生性瘢痕组织中miR21与自噬表达水平的相关性;3.收集2017年11月至2018年12月在川北医学院附属医院烧伤整形外科行手术切除的瘢痕疙瘩组织、增生性瘢痕组织、正常皮肤组织各3例。进行组织原代细胞培养,取3-5代成纤维细胞,提取细胞总RNA,并逆转录为cDNA备用,应用实时荧光定量PCR检测miR21及自噬相关因子P62的mRNA表达水平。提取细胞总蛋白质,应用Western Blot检测自噬相关因子LC3、P62的蛋白表达水平。研究结果:1.实时荧光定量PCR结果显示miR21、P62在增生性瘢痕、瘢痕疙瘩组织及细胞中的mRNA表达水平高于正常皮肤组织,LC3无明显差异。增生性瘢痕在组织及细胞水平miR21表达量均高于瘢痕疙瘩,P62、LC3表达无明显差异;2.Western Blot结果显示P62及LC3II在增生性瘢痕、瘢痕疙瘩组织及细胞中蛋白表达水平高于正常皮肤组织,LC3II/LC3I表达无明显差异;3.分析增生性瘢痕与瘢痕疙瘩的组织中miR21与自噬因子P62、LC3II的相关性显示增生性瘢痕组织中miR21与P62、LC3的蛋白表达量呈正相关,与mRNA表达量无明显相关性。瘢痕疙瘩组织中miR21与P62、LC3的蛋白及基因表达量均无明显相关性。结论:1.病理性瘢痕中自噬水平降低,推测自噬水平的变化可能参与了瘢痕组织的形成。2.病理性瘢痕中miR21的表达增高,推测可能与瘢痕形成有关。3.增生性瘢痕组织中miR21与自噬因子P62,LC3II蛋白表达量呈正相关,推测增生性瘢痕中miR21与自噬水平存在伴随关系,可作为进一步研究靶点。