苦豆子中的苦豆碱、氧化苦参碱体外抑精、体内避孕作用及其机制初探

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目的:通过观察苦豆子生物碱对于小鼠和人体精子制动的作用以及对雌性大鼠妊娠的影响,为寻求有效的体外杀精剂提供实验依据。方法:1、采集小鼠睾丸与附睾尾精子,应用Sander-Cramer法筛选出苦豆子生物碱中苦豆碱、氧化苦参碱对小鼠精子的最低有效杀精浓度,通过伊红染色和活力恢复等实验探究其制动效果及其可逆性。采用低渗膨胀实验观察苦豆碱、氧化苦参碱对小鼠精子膜功能的影响。姬姆萨染色检测苦豆碱、氧化苦参碱对小鼠精子顶体结构的影响以及对小鼠精子凋亡的影响。2、采集人体健康且具有生育能力的精液,按照与小鼠体外杀精实验相同的方法进行操作,并借助精子分析系统进行精子活力以及人体精子的最低有效杀精浓度的检测。依次通过伊红染色、活力恢复、低渗膨胀、姬姆萨染色、细胞凋亡等实验探究杀精作用及其机制。3、雌性大鼠采用阴道注射给药,与雄鼠交配探究苦豆碱、氧化苦参碱对雌性大鼠妊娠的影响,并解剖雌鼠阴道用肉眼观察是否有充血红肿的现象。结果:1、小鼠精子制动实验结果显示苦豆子生物碱中苦豆碱、氧化苦参碱对精子有杀精作用且具有不可逆性,槐果碱与金雀花碱则无法有效杀灭精子。其中苦豆碱、氧化苦参碱对小鼠精子的最低有效杀精浓度分别为2mg/ml、400mg/ml,低渗膨胀实验和姬姆萨染色发现苦豆碱、氧化苦参碱可以影响精子的质膜和顶体结构,同时凋亡实验显示药物可以引起精子细胞凋亡,影响精子功能从而降低精子的活力。2、人体精子制动实验结果显示,通过精子分析系统检测发现苦豆碱、氧化苦参碱对人体精子的最低有效杀精浓度分别为5mg/ml、800mg/ml,约为小鼠精子杀精浓度的2倍。低于最低有效杀精浓度的苦豆碱对于人体精子的抑制作用具有明显的剂量—时间依赖关系。其杀精机制研究发现苦豆碱、氧化苦参碱可以有效破坏人体精子膜功能和顶体结构,可引起人体精子的异常凋亡。3、雌性大鼠体内避孕实验结果发现苦豆碱、氧化苦参碱可明显抑制雌性大鼠的妊娠率,具有避孕作用,且解剖雌鼠阴道肉眼观察并未发现充血红肿等现象。结论:苦豆碱、氧化苦参碱可以有效制动精子,苦豆碱具有更强的杀精作用,有望成为体外杀精剂进行研究开发。
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