DHCR24是3-β-脱氢胆固醇-△24还原酶,可催化链甾醇24位上的双键还原为单键合成胆固醇。该酶由516个氨基酸组成,生物信息学预测显示其肽链的N端存在跨膜信号肽,FAD结合结构域靠近N端,位于跨膜域的C端一侧,前期实验证明DHCR24大部分定位在内质网中。最近的研究显示DHCR24还是一个具有抗细胞凋亡作用的多功能蛋白。它可以通过抑制caspase-3活性发挥抑制神经细胞凋亡的作用,还能够作为雌激素、IGF-1以及甲状腺激素等激素的调节子在激素的神经保护及神经细胞发育调节中发挥作用。此外,研究表明DHCR24还能通过清除过氧化氢对抗氧化应激引起的细胞凋亡。因此DHCR24的抗细胞凋亡可能是通过多种途径实现的。深入研究DHCR24的抗细胞凋亡功能及其表达调控,将为神经退行性疾病以及其他以氧化应激为分子机制的常见病的治疗提供新的思路和方法。本研究工作根据DHCR24（Genebank Acession NO.: BC011669. 2）的序列信息及对其跨膜域的生物信息学预测结果,分别设计特异性引物,以质粒pIVEX2.4a/DHCR24为模板PCR扩增全长及跨膜域缺失的DHCR24序列,将扩增产物进行T-A克隆,经酶切、DNA测序鉴定正确后,分别酶切后连接入pEGFP-N1和pDsred-C1两种真核表达载体,构建成在其C端融合了EGFP绿色荧光蛋白pEGFP-N1-DHCR24 , N端融合了Dsred红色荧光蛋白pDsred-C1-DHCR24,以及跨膜域缺失N端融合了Dsred红色荧光蛋白pDsred-C1-DHCR24 TM（-）的重组质粒。随后将构建好的重组质粒转染小鼠神经母细胞瘤细胞株N2A细胞,通过免疫细胞化学荧光确定DHCR24融合蛋白的表达及其亚细胞定位。利用构建好的重组质粒转染N2A细胞,通过荧光蛋白酶保护法（FPP）分析DHCR24 DHCR24在内质网的拓扑结构,并确定其FAD结合域在内质网的定位,最后通过活性氧检测试剂盒（DCFH-DA）研究DHCR24的定位对其功能的影响。本文研究结论:三种表达DHCR24荧光融合蛋白的重组质粒经酶切和测序鉴定正确并在N2A细胞中高量表达,细胞化学免疫荧光结果证明全长的DHCR24融合蛋白分布于内质网中,跨膜域缺失的DHCR24融合蛋白定位于胞浆。通过FPP法确定了DHCR24在内质网中的定位,即FAD结合域位于内质网的外侧。证明了DHCR24的ROS清除作用与其在内质网的定位无关,为其抗内质网应激作用分子机制的阐明奠定了基础。