左归丸、右归丸对C/EBPα、PPARγ基因调控BMSCs分化及其甲基化的影响

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目的:通过观察右归丸、左归丸含药血清干扰不同时段BMSCs的分化,检测C/EBPα、PPARγ两种基因片段在成脂分化过程中表达的规律,以及相关基因启动子序列甲基化的状况。探讨右归丸、左归丸抑制成脂的表观遗传学机制。  方法:在含药血清制备及BMSCs鉴定、分离、培养、传代、纯化的基础上,随机将2代BMSCs分成A组:正常对照组、成脂诱导组、左归丸组,B组:正常对照组、成脂诱导组、右归丸组,A组中分别用正常培养基、AM、10%左归丸含药血清L-DMEM加AM干预7天,B组中分别用正常培养基、AM、10%右归丸含药血清L-DMEM加AM干预7d后;采用RT-PCR技术,检测不同实验分组PPARγ、C/EBPα基因的表达情况,采用MSP法检测PPARγ、C/EBPα基因启动子区域甲基化状态。  结果:1、运用全骨髓体外贴壁法培养细胞,经细胞形态学以及细胞表面抗原鉴定为骨髓间充质干细胞;2、含药血清干预7d,A组中左归丸组与成脂诱导组、对照组相比较,PPARγ基因、C/EBPα基因的表达水平均有明显的下调,组间比较差异明显(p<0.05);3、含药血清干预7d,B组中右归丸组与成脂诱导组、对照组相比较,PPARγ基因、C/EBPα基因的表达水平均有明显的下调,组间比较差异明显(p<0.05);4、经MSP技术检测:各组PPARγ基因启动子区域甲基化程度依次:成脂诱导<对照组<右归丸组<左归丸组;各组C/EBPα基因启动子区域甲基化程度依次:成脂诱导<对照组<左归丸组<右归丸组。  结论:1、通过左归丸、右归丸均能使PPARγ、C/EBPα基因的表达水平明显下调,且能够使PPARγ、C/EBPα基因启动子区域甲基化程度增高,从而达到抑制脂肪细胞分化的作用;2、左归丸抑制PPARγ基因的表达明显高于右归丸抑制PPARγ基因的表达,而右归丸抑制C/EBPα基因的表达却远远高于左归丸。
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