原发性肝癌患者中CD4+CD25+调节性T细胞的研究

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目的:研究原发性肝癌患者外周血及肝癌组织中CD4+CD25+调节性T细胞和CCL22的表达水平及临床意义。方法:运用流式细胞技术检测100例原发性肝癌患者外周血和肝癌组织中CD4+、CD8+、NK细胞以及CD4+CD25+调节性T细胞的数量,20例健康志愿者为对照组;RT-PCR方法检测CD4+CD25+调节性T细胞特异性转录因子FOXP3基因及CCL22在外周血中的表达,6例健康志愿者外周血作为对照;ELISA方法检测相同患者外周血血清中的TGF-β和IL-10的浓度;免疫组化S-P法检测40例肝癌组织中CCL22的表达,12例正常肝脏组织作为对照。结果:1.肝癌患者外周血中CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK细胞的比例分别为57.32±4.69%,33.35±7.01%,23.79±6.30%,1.43±0.47,11.91±2.54%,对照组分别为62.95±0.88%,35.85±2.88%,22.03±2.19%,1.65±0.23,19.42±1.76%,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。2.肝癌患者外周血中Tregs细胞为17.63±4.11%,对照组7.68±1.32%,两者比较差异有统计学意义(P=0.000),提示HCC患者外周血中的Tregs细胞的数量明显高于对照组。3.肝癌患者肝癌组织中Tregs细胞为5.24±3.83%,癌周组织中的Tregs细胞为0.73±0.90%,两者比较差异有统计学意义(P=0.000),提示Tregs细胞大量聚集于肿瘤实质中。4.肝癌患者外周血血清中TGF-β和IL-10的浓度分别为161.39±19.09pg/ml和173.48±20.55pg/ml,正常对照组分别为67.55±10.25pg/ml和32.45±7.32pg/ml,HCC患者外周血中TGF-β和IL-10的浓度明显高于正常对照组(P=0.005和P=0.001)。5.肝癌患者外周血中FOXP3mRNA为0.36±0.06,对照组中FOXP3mRNA为0.17±0.03,两者比较差异有统计学意义(P<0.01)。肝癌患者外周血中CCL22mRNA为0.31±0.03,对照组中CCL22mRNA为0.15±0.03,HCC患者外周血中CCL22的表达高于正常对照组(P<0.01)。肝癌组织中FOXP3mRNA为1.28±0.26,癌旁组织中FOXP3mRNA为0.48±0.16,两者比较有统计学意义(P<0.01)。肝癌组织中CCL22mRNA为1.20±0.20,癌旁组织中CCL22mRNA为0.69±0.01,肝癌组织中CCL22的表达明显高于癌旁组织(P<0.01)。6.免疫组化方法检测肿瘤组织中CCL22的表达,肝癌组织、癌旁组织和正常肝脏组织中CCL22的光密度分别为0.13±0.06、0.09±0.05和0.06±0.05,肝癌组织中CCL22明显高于癌旁组织及正常肝脏组织(P<0.05)。结论:1.肝癌患者的细胞免疫功能明显下降。2.肝癌患者外周血中Tregs细胞明显高于对照组,表明Tregs细胞与肝癌患者的免疫功能调节紊乱有关。3.肝癌患者外周血血清中TGF-β和IL-10的浓度均增高,Tregs细胞可能通过TGF-β和IL-10发挥免疫调节作用。4.肝癌患者外周血及肝癌组织中FOXP3增高,说明增高的CD4+CD25+细胞主要是Tregs细胞。5.肝癌患者肝癌组织中Tregs细胞明显增高,Tregs细胞可能与其局部微环境免疫紊乱有关。6.肝癌患者外周血及肝癌组织中CCL22增高,可能与HCC患者的Tregs细胞增高有关。
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