【摘 要】
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目的 研究大鼠骨髓基质细胞(Bone marrow stromal cells,BMSC)的取材、纯化、扩增方法及其生物学性状。探讨转化因子β和神经生长因子联合诱导成年大鼠骨髓基质细胞分化成
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目的 研究大鼠骨髓基质细胞(Bone marrow stromal cells,BMSC)的取材、纯化、扩增方法及其生物学性状。探讨转化因子β和神经生长因子联合诱导成年大鼠骨髓基质细胞分化成神经元样细胞的可能性及成年大鼠骨髓基质细胞在损伤脊髓组织提取液中向神经元样细胞分化的可能性,利用携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的腺病毒载体转染骨髓基质细胞,进而观察骨髓基质细胞在转化因子p和神经生长因子联合诱导下,向神经元样细胞分化的可能性,探讨其在治疗脊髓损伤中潜在应用价值。 方法 (1)从6-8周SD大鼠的股骨、胫骨中取材,用含有10%胎牛血清的IMDM培养液培养,用传代控制及贴壁分离法分离、纯化BMSC,并观察BMSC的生长状态,测定BMSC的生长曲线、分裂指数、贴壁率,利用免疫组织化学方法对BMSC进行表型分析。待BMSC传代至第5代时,神经生长因子(NGF)诱导前2h先用含1μg/L转化因子β(TGF-β)及IMDM/10%FBS培养液培养,以促进细胞分裂,然后用NGF作诱导剂,观察细胞形态的变化,并采用免疫组织化学法检测诱导后的细胞表达NF、NSE、GFAP特异性标志物情况。 (2)取健康SD大鼠12只,按文献方法(50g重物压迫5min)制成T9节段脊髓重度损伤。分别于伤前、伤后1天、伤后1周及伤后3周各取3只大鼠,10%水合氯醛(300mg/kg)腹腔麻醉下完整取出T7-T11节段脊髓(每份标本重130-140mg),提取损伤脊髓组织提取液。从大鼠骨髓中分离
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