重庆猪源大肠杆菌多重耐药性与Ⅰ型整合子的相关性研究

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致病性大肠杆菌是兽医临床上最常见的病原菌,给畜牧业的发展造成严重的危害。随着抗菌药物的广泛使用,细菌耐药性问题日益严重。因此了解重庆地区规模化猪场致病性大肠杆菌的耐药性水平,研究Ⅰ型整合子在猪场致病性大肠杆菌中的存在频率,分析其携带的耐药基因盒及与细菌耐药谱之间的关系,为控制致病菌的耐药性传播提供科学依据。本研究采用WHO推荐的纸片扩散法,按NCCLS(2006)判定标准,检测了101株分离自规模化猪场的致病性大肠杆菌对26种常用抗菌药物的耐药性,分析比较各来源致病性大肠杆菌对各种抗菌药物的耐药率及多重耐药情况。试验结果表明:101株致病性大肠杆菌均表现多重耐药,对四环素、青霉素、利福平、克拉霉素100%耐药,对林克霉素、氨苄青霉素、红霉素、复方新诺明的耐药率超过90%,对氯霉素、阿莫丽林、氟哌酸、环丙沙星以及多粘菌素B、痢特灵、氟嗪酸、新霉素的耐约率也较高,对先锋V、头孢拉定和先锋必的耐药率相对较低。耐药谱多集中在耐18种药物到22种药物之间;所分离致病性大肠杆菌对抗菌药物存在严重的耐药性,耐药谱不断增加,其耐药性亦不断发生变迁。根据Ⅰ型整合子的结构设计了3对引物,分别对Ⅰ型整合子的Ⅰ型整合酶基因、基因盒插入区基因和3保守端基因进行扩增,以检测致病性大肠杆菌Ⅰ型整合子。试验结果表明:采用PCR方法成功克隆出Ⅰ型整合子基因片段,101株大肠杆菌中有67株菌检测出Ⅰ型整合子,其检出率为66.3%。对基因盒插入区PCR扩增产物用HinfI核酸内切酶进行酶切;对不同长度的基因盒插入区基因进行测序,测序结果使用NCBI在线Blast与GenBank中已收录的相关序列进行比对,分析其携带的耐药基因盒。试验结果表明:可变区扩增片段长度相同的其酶切图谱相同,扩增片段长度不同的酶切图谱不同,说明相同长度的可变区携带的耐药基因盒相同。本试验检测的Ⅰ型整合子携带的耐药基因为dfrA12,dfrA17,aadA1,aadA2,aadA5,aadB和cmlA6,编码对链霉素—壮观霉素,庆大霉素—卡那霉素,甲氧苄啶和氯霉素的耐药基因。分析Ⅰ型整合子与致病性大肠杆菌多重耐药性之间的关系发现:Ⅰ型整合子与多重耐药之间有密切关系,单个菌株携带的耐药基因与表型之间没有对应关系,但整合子在耐药菌株之间的分布却比较集中,耐18种药物到耐22种药物之间的65株多重耐药菌株中,有51株检测出Ⅰ型整合子,检出率为78.5%。
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