植物提取物和精油及其化合物对长角血蜱的杀蜱活性

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长角血蜱Haemaphysalis longicornis是重要的病原媒介,传播多种病原体而导致疾病,严重危害人畜健康。目前,蜱类防治主要以化学合成的拟除虫菊酯类杀虫剂为主,由于过量或不当使用对环境以及非靶标生物造成巨大影响,为其可持续利用带来极大挑战。因此,研发安全、有效、环境友好型的蜱类防治方法极为重要,其中利用植物提取物或植物精油防治蜱具有广阔应用前景。由于植物提取物或植物精油通常由多种挥发性化合物组成,且这些组分含量受多种生物和非生物因子的影响,明确各组分的杀蜱活性及其交互作用对有效利用植物提取物或植物精油防控蜱类具有重要意义。本论文以长角血蜱为对象,对植物提取物和植物精油在长角血蜱杀灭过程中的作用进行了系统研究,以期为后续有效利用奠定基础。利用甲醇对中国肉桂Cinnamomum cassia、广藿香草Pogostemon cablin和苦参Sophora flavescens活性成分进行初步提取,通过局部用药方法筛选各粗提物对长角血蜱饥饿成蜱的杀蜱活性,对具有明显杀蜱活性的粗提物进一步通过成蜱浸没实验(adult immersion test,AIT)分析其对饱血雌蜱的杀灭效应。结果表明,与其他粗提物相比,处理24 h后,20%中国肉桂粗提物显示较强的杀蜱活性(死亡率达93.00%),表明肉桂提取物对长角血蜱饱血雌蜱具有杀灭作用。1.25%肉桂粗提物可使饱血雌蜱产卵率降低12.70%,当肉桂甲醇提取物浓度达20%时,产卵率下降98.06%,且导致卵不能孵化,因此中国肉桂提取物用于后续实验研究。深入研究了肉桂粗提物和肉桂精油对长角血蜱饥饿幼蜱和若蜱的杀蜱活性,并利用气相色谱质谱对肉桂提取物和肉桂精油进行组份鉴定,选取具有饥饿幼蜱和若蜱杀灭活性的有效组份,检测其对饱血幼蜱和若蜱的杀灭活性,最后检测其对饥饿若蜱的吸血驱避效应。结果表明,肉桂醛((E)-cinnamaldehyde)是肉桂提取物的最主要组份,含量达到50.79%,在肉桂精油中含量达89.95%。肉桂粗提物处理24 h对饥饿幼蜱和若蜱的半致死浓度分别为11.56 mg/m L和49.18 mg/m L。肉桂精油、肉桂醛和氰戊菊酯(阳性对照)对饥饿幼蜱和若蜱具有明显的杀灭活性,其处理饥饿幼蜱24h后的半致死浓度分别为3.81 mg/m L、3.15 mg/m L和0.14 mg/m L,对饥饿若蜱的半致死浓度分别为21.31 mg/m L、16.93 mg/m L和1.89 mg/m L。肉桂精油、肉桂醛和氰戊菊酯对饱血幼蜱和若蜱也有杀灭活性,其对饱血幼蜱的半致死浓度分别为1.46 mg/m L、16.69 mg/m L和3.86 mg/m L,其处理饱血若蜱24h后的半致死浓度分别为17.96 mg/m L、0.06mg/m L和5.05 mg/m L。在若蜱吸血驱避实验中,33.86 mg/L的肉桂醛具有明显的驱避作用。明确肉桂精油各组分对其杀蜱活性的贡献以及各组份的协同效应对后续肉桂精油的应用具有重要意义。本论文研究了肉桂精油(提取自中国肉桂和锡兰肉桂Cinnamomum zeylanicum)的活性组份及其对长角血蜱若蜱和成蜱的杀灭活性。结果表明,苯甲酸苄酯(benzyl benzoate)对若蜱和成蜱毒性最高,对若蜱的半致死浓度为24.41 mg/m L,成蜱的半致死浓度为3.99 mg/m L。将各组份在30%致死浓度进行组合,对长角血蜱表现出协同效应,其中苯甲酸苄酯与肉桂醛1:1组合协同效应最高,协同指数达3.42,而肉桂醛、丁香酚(eugenol)和芳樟醇(linalool)进行1:1:1组合,协同效应最低,协同指数仅为1.20。利用肉桂精油或肉桂醛处理长角血蜱幼蜱和若蜱后,其酯酶(esterase)、单加氧酶(monooxygenase)、谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione-S-transferase(GST))、乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase)和Na+/K+ATP酶(Na+/K+-adenosine triphosphatases)活性随处理时间明显改变(p<0.05);苯甲酸苄酯显著影响长角血蜱成蜱的乙酰胆碱酯酶活性(p<0.05);在分子水平上,肉桂精油或肉桂醛影响长角血蜱幼蜱线粒体膜转运蛋白(ATP binding cassette)ABCB10表达(p<0.05)。最后,系统分析了肉桂精油、肉桂醛和苯甲酸苄酯对黄粉虫Tenebrio molito、异色瓢虫Harmonia axyridis和水生大型蚤Daphnia magna等非靶标生物的毒性作用。结果表明,局部施加肉桂精油(测试浓度为长角血蜱饥饿幼蜱和若蜱的半致死浓度:LC50=3.81和21.31 mg/m L)或肉桂醛(测试浓度为长角血蜱饥饿幼蜱和若蜱的半致死浓度:LC50=3.81和21.31 mg/m L)对黄粉虫和异色瓢虫均无影响。然而局部施加氰戊菊酯(阳性对照,测试浓度为长角血蜱饥饿若蜱半致死浓度:LC50=1.89 mg/m L)可导致黄粉虫(18.00±7.35%)和异色瓢虫(8.00±3.74%)成虫死亡率明显提高。另外,喷洒施加2倍的长角血蜱成蜱半致死浓度(2 x LC50=28.34)肉桂醛可明显提高黄粉虫死亡率(16.67%),但与阳性对照(63.33%)相比,死亡率仍相对较低。喷洒长角血蜱成蜱半致死浓度(LC50=28.34)或1/2半致死浓度的肉桂醛或苯甲酸苄酯(长角血蜱成蜱半致死浓度LC50=3.99,1/2的LC50和2 x LC50)对黄粉虫成虫没有明显影响。局部施加1/2长角血蜱成蜱半致死浓度的肉桂醛24h可使水生大型蚤死亡率达100%。局部施加1/2长角血蜱成蜱半致死浓度的苯甲酸苄酯24h,水生大型蚤死亡率仅12.5%,但处理48h后,水生大型蚤的死亡率可达99.75%。综上,本论文证明了肉桂提取物和肉桂精油以及肉桂醛等具有杀蜱活性,可作为长角血蜱防治的潜在植物源性杀蜱剂。然而,非目标水生生物的高死亡率接触肉桂EO成分可能是基于该EO开发潜在植物杀螨剂的主要挑战。而且,肉桂精油的杀蜱活性与其苯甲酸苄酯组分密切相关,苯甲酸苄酯可与肉桂精油中的肉桂醛等其他组份发挥协同效应。
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