环丙沙星基于肠道菌群影响棕尾别麻蝇生长发育机制的研究

来源 :陈婷君 | 被引量 : 0次 | 上传用户:plumblossommeihua
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背景:法医昆虫学和法医微生物学作为法医学新兴学科,目前在死亡时间和死亡原因推断等方面已经有较为广泛的应用。但都受到多变的环境因素的限制。基于嗜尸性蝇类在尸体上的定殖行为和幼虫的摄食繁衍,嗜尸性蝇类的肠道菌群或许将成为两个学科的交汇点。同时,大量案例和研究已证实外源性药(毒)物的存在会影响幼虫的生长速度。探究药物是否会影响蝇类生长发育的改变,以及生长发育的改变是否与蝇类肠道菌群有关,将进一步提升死亡时间推断(postmortem interval,PMI)的准确性。目的:探索棕尾别麻蝇肠道菌群的组成,分析肠道菌群变化与蝇体宏观生长情况之间的潜在关系,结合其他蝇种和环境样本(饲养肉糜)的菌群组成进行比较分析,明确环丙沙星(Ciprofloxacin)对棕尾别麻蝇肠道菌群的影响,并分析肠道菌群对其生长发育的影响,提升运用嗜尸性蝇类生长发育规律进行PMI推断的准确性。方法:(1)建立纯化种群,分别在空白对照、低浓度和高浓度环丙沙星的培养基上饲养棕尾别麻蝇并收集其生长发育数据,每组均提取三龄期、离食期、成虫期的肠道和蛹期的组织内容物(除去蛹壳后的组织)进行16S r DNA测序。(2)在同样的饲养条件下,用同样方法收集未接触环丙沙星的野亚麻蝇作为对照组。(3)同样的饲养条件下建立昆虫隔绝模型,分别在幼虫发育生长过程中采集即时暴露组和昆虫隔绝组的环境样本(饲养肉糜)。(4)根据测序结果,对特定菌种通过实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)进一步定量分析验证。结果:(1)生长发育的影响:环丙沙星影响下棕尾别麻蝇的发育速率加快,但蛹重和成虫体重都较轻,发育关键时间节点前移;(2)棕尾别麻蝇肠道菌群分析:棕尾别麻蝇在整个生长发育过程中的肠道菌群群落丰度存在组内差异,在环丙沙星存在条件下,同一发育阶段的棕尾别麻蝇肠道菌群较之对照组存在较大差异。环丙沙星组的三龄幼虫肠道中所含伊格氏菌属的占比远高于对照组。(3)虽然同为麻蝇科,棕尾别麻蝇和野亚麻蝇同一生活期的肠道菌群仍存在一定的组成差异。(4)在与昆虫接触后,昆虫即时暴露组肉糜在饲喂棕尾别麻蝇后的细菌群落结构与使用前发生了较大的改变。昆虫隔绝组的肉糜在隔绝蝇虫放置的过程中与使用前新鲜猪肺相比,其细菌群落结构优势属的主要类别不变,但类香味菌属类香味菌属(Myroides)的占比显著上升。伊格氏菌属和沃尔法氏杆菌属(Wohlfahrtiimonas)仅出现于昆虫即时暴露组肉糜。(5)对特定菌种的q PCR结果:Wohlfahrtiimonas chitiniclastica和Ignatzschineria indica的含量在幼虫的三龄期肠道、离食期肠道、蛹前期组织内容物中呈总体上升的趋势。结论:环丙沙星影响棕尾别麻蝇的生长发育,并使同一时期的棕尾别麻蝇肠道菌群结构相比未加药时发生改变;伊格氏菌属是棕尾别麻蝇幼虫生长发育期重要的肠道菌属,其在肠道菌群中含量的增加可能是加药组幼虫生长速率加快的原因;棕尾别麻蝇能够选择其肠道细菌组成,从环境中获得并保留有益于自身的微生物,促进生长发育。图17幅、表3个、参考文献105篇
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