大蹼铃蟾皮肤共生菌分离和两栖类IL-1β加工过程的研究

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两栖类是联系哺乳动物和鱼类的重要分类单元,其中非洲爪蟾长期以来一直是重要的模式动物。随着21世纪免疫学与生态学的蓬勃发展,两栖类在研究天然免疫或生态毒理相关问题时成为可资利用的研究模型。由于皮肤裸露且生存条件多变,传统上普遍认为两栖类拥有强大的天然免疫系统,其中尤以抗菌肽、吞噬细胞以及NK细胞三类为代表。但在面对某些致死性病原体感染时,令人困惑的是不同两栖类物种在易感性和抗性上有着极大的区别。而不同的皮肤共生菌组成与体内炎症激活方式(包括了IL-1β的产生与加工)上的差异可能是两栖类免疫功能同中有异的关键所在,而这两方面的研究将对扩充我们在天然免疫学上的视野大有助益。  本研究中首先采用标准Ⅰ号营养琼脂培养从大蹼铃蟾皮肤中分离能够在固体培养基中定植生长的共生菌,共得到5个不同细菌的16SrRNA近全长序列,测序后使用RDP-Ⅱ进行比对鉴定,结果显示这些细菌分属变形菌门、厚壁菌门和放线菌门中5个不同的菌属。  其次将大蹼铃蟾IL-1β的部分片段进行了重组表达并得到IL-1β的多克隆抗体。以具有条件致病性的大蹼铃蟾皮肤共生菌作为病原体进行体内腹腔感染和体外脾细胞刺激实验。通过Western blot发现了大蹼铃蟾IL-1β可能的前体以及成熟肽形式。最后基于生化分析与结构比对,结合目前对于非哺乳类IL-1β转化酶酶切位点的研究进展,预测了大蹼铃蟾Caspase-1加工IL-1β的酶切位点。
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