基于植物酯酶的农药残留光谱检测研究

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大规模、大范围的施用农药为现代化农业生产带了巨大的经济效益。然而,随着粮食产量大幅度提高,农药残留也给生态环境以及人类自身的健康带来了巨大的威胁。尽管基于大型检测仪器的检测方法灵敏度高、准确性强,但其高昂的成本和繁琐的操作流程,严重制约了其在现代农药残留检测中的发展普及。因此,开发快速、便捷且准确的农药残留检测方法,实现实时、快速检测农药残留实非常必要。本文基于植物酯酶自身荧光性能探究其对农药的检测,探究了植物酯酶同农药作用机理,进而建立植物酯酶和卟啉复合体系,并研究其双光响应信号性能,为制备响应速度快、灵敏度高的复合生物传感农残检测系统奠定基础。本文主要完成工作如下:(1)、依据植物酯酶自身荧光特性及氨基甲酸酯类农药对植物酯酶的抑制作用,提出一种检测水相中多菌灵的荧光新方法。并对实验中溶剂、pH值、温度和检测时间进行优化,在最适条件下该方法可以选择性检测水相中多菌灵,线性范围为0.105-0.418μM,检测限可以达到0.105μM(0.02ppm)。通过模拟实际样品检测,结果表明该方法可以很好的应用于实际水相样品中多菌灵的检测,回收率为93.4-105.0%,RSD小于3%。通过荧光淬灭法研究植物酯酶与多菌灵的作用机制,证明多菌灵是通过范德华力和氢键与植物酯酶相结合。(2)、针对植物酯酶检测农药的酶抑制法进行改进,以吲哚乙酸酯作为酶底物和显色剂,建立了一种双信号检测农药的方法。此方法对敌百虫的检测效果最好,拟合曲线斜率较大,可见分光光度法和荧光法的检测限分别为7ppb和1ppb;对灭多威的检测限分别为40ppb和11ppb;对涕灭威的检测分别为10ppb和20ppb。这些检测限均小于或等于国标规定的MRL(Maximum Residue Limit),可以用于这三种农药的检测。但该方法不适用于多菌灵的检测。(3)、采用不同的植物酯酶-卟啉复合物,通过紫外-可见分光光度法和荧光法对敌百虫、多菌灵、灭多威和涕灭威进行了检测。得到不同复合物同四种农药作用的可见光吸收光谱图、荧光光谱图、相应的校准曲线,计算了不同体系对不同农药检测的灵敏度和检测限。在适当的溶剂体系中,植物酯酶-HTPPS4可见光分光光度法仅对敌百虫的检测效果较好,检测限7ppb,灵敏度0.86;植物酯酶-卟啉体系荧光法对敌百虫检测效果没有可见光分光光度法检测效果好,但均能检测出低于国标规定的最大允许残留量(MRL)的敌百虫;植物酯酶-ZnTPP复合物双光信号对多菌灵的检测限均最低,依次为9ppb和6ppb,灵敏度为1.438和816.49;植物酯酶-CuTPP复合物可见光吸光光度法对灭多威的检测限最低,为8ppb,灵敏度为1.2;几种可用于可见光吸光光度法检测涕灭威植物酯酶-卟啉复合物,其检测限均小于MRL,均可用于检测涕灭威,最低检测限为10ppb,几种对涕灭威有荧光检测作用的复合物对涕灭威的检测限都略大于MRL,不适用于涕灭威的荧光检测。
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