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水产动物腹水病是由拟态弧菌(Vibrio mimicus，Vm)引起的一种重要的细菌性疾病。现阶段尚无有效的疫苗用于该病的免疫预防。外膜蛋白U（Outer membraneprotein U，OmpU）是存在于多种病原弧菌中比较保守的主要外膜蛋白，且已探明该蛋白是霍乱弧菌和创伤弧菌的保护性抗原。但拟态弧菌OmpU蛋白对水产动物是否具有免疫保护作用至今尚不明了。本研究利用原核表达系统成功表达了拟态弧菌安徽分离株的OmpU蛋白，并检测分析了可溶性重组OmpU蛋白的免疫原性、免疫反应性以及对实验鱼的免疫保护作用。研究结果为进一步研制拟态弧菌OmpU蛋白疫苗奠定了基础。为了制备抗拟态弧菌抗体，将04-13安徽分离株的甲醛灭活菌体（200亿个/mL）与双相乳化佐剂充分乳化制成免疫原免疫家兔。经三次免疫后，免疫兔血清中抗菌抗体的凝集价高达1:225，完全可用于后续的Western blot检测分析。为了获得高效表达的可溶性重组OmpU蛋白，首先应用SignalP在线分析软件对拟态弧菌04-13菌株OmpU基因全序列（GenBank收录号：DQ846743）进行信号肽分析，发现其5’端66bp编码的22个氨基酸组成信号肽。对此，设计特异性引物，PCR扩增切除信号肽的OmpU基因（1004bp），将PCR扩增产物定向插入pET-32a（+）载体，构建出原核表达重组质粒pET-32a-OmpU。然后采用正交试验设计L9（34）方案，通过SDS-PAGE分析培养基种类、诱导温度、诱导时间和诱导剂浓度等因素对蛋白表达的影响，优化出OmpU蛋白最佳表达条件，即重组菌pET-32a-OmpU/Rosseta接种LB培养液，37℃振荡培养3h，然后加入0.5mmol/L IPTG继续诱导4h，即可获得较高表达量（496mg/L）的可溶性重组OmpU蛋白。为了分析可溶性重组OmpU蛋白的免疫原性、免疫反应性以及对实验鱼的免疫保护作用，在优化条件下诱导重组菌大量表达，使用镍离子金属螯合亲和层析柱对可溶性重组OmpU蛋白进行纯化并做Western blot分析。结果显示纯化后蛋白纯度达98%，浓度为3.2mg/mL，能与抗菌抗体发生特异性反应。以重组OmpU蛋白、标签蛋白His和灭活菌体免疫锦鲤，四免后第7天心脏采血，采用ELISA检测试剂盒测定血清IgM含量，同时以浓度为3×109cfu/mL的菌液（100LD50）人工感染锦鲤。结果显示，四免后实验鱼血清IgM含量分别为3.32mg/mL、2.95mg/mL和4.51mg/mL，与阴性血清IgM含量相比（2.39mg/mL），均有不同程度升高。OmpU蛋白免疫组和灭活菌体免疫组的鱼免疫保护率分别为73%和87%，His蛋白免疫组和PBS对照组鱼全部死亡。表明重组OmpU蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性，对实验鱼有一定的免疫保护作用。