【摘 要】
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盖塔病毒病是由盖塔病毒（Getah virus,GETV）引起的一种蚊媒传染病,由于缺少相关疫苗,GETV病在全球尤其是在我国的流行趋势日益严峻,对动物安全和公共卫生构成了潜在威胁,但关于GETV病在我国流行病学调查的相关报道较少,而且尚无成熟的GETV抗体诊断试剂盒,这对了解GETV病的流行情况带来很大困难。因此,建立快速、灵敏、适合大规模样品检测的GETV抗体检测方法是充分了解GETV病流行现
【基金项目】
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国防重大项目（编号:AWS17J016）；
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盖塔病毒病是由盖塔病毒（Getah virus,GETV）引起的一种蚊媒传染病,由于缺少相关疫苗,GETV病在全球尤其是在我国的流行趋势日益严峻,对动物安全和公共卫生构成了潜在威胁,但关于GETV病在我国流行病学调查的相关报道较少,而且尚无成熟的GETV抗体诊断试剂盒,这对了解GETV病的流行情况带来很大困难。因此,建立快速、灵敏、适合大规模样品检测的GETV抗体检测方法是充分了解GETV病流行现状的迫切需求。本研究通过血清中和试验对新疆四个地区（克拉玛依市、阿克苏地区、昌吉回族自治州和伊犁哈萨克自治州）的马匹开展GETV病血清流行病学调查;同时利用原核表达系统表达GETV-E2结构域蛋白（GETV-E2d）,以纯化后的重组蛋白作为包被抗原,以筛选的GETV阴、阳性马血清为一抗,以HRP标记的兔抗马血清为二抗,采用棋盘法进行反应条件的优化,建立马GETV抗体的间接ELISA诊断方法。研究结果如下:（1）新疆四个地区732份马血清样品中,检出阳性血清465份,中和抗体阳性率达63.5%,阳性血清中和抗体几何平均滴度（GMT）为1:149.3;提示在这些地区马群中,GETV感染普遍存在。（2）重组蛋白GETV-E2d主要以包涵体形式表达,最佳诱导条件为:37℃,0.8mmol/L的IPTG,诱导表达12 h;纯化、透析后重组蛋白浓度为0.5 g/L;制备的重组蛋白具有良好的反应原性和免疫原性,制备的GETV-E2d兔源多抗血清Ig G效价达1:1600000。（3）成功建立以GETV-E2d为抗原的马GETV抗体间接ELISA诊断方法,其最佳反应条件为:抗原浓度为4μg/m L、4℃包被过夜;以1%BSA封闭2 h,待检血清和酶标二抗的稀释度为1:40和1:3000,孵育时间分别为60 min和90 min;TMB底物作用时间为20 min;本方法具有较好的特异性、灵敏性和重复性;使用建立的间接ELISA方法检测210份马血清样品,结果显示与血清中和方法具有较高的总体符合率（92.4%）和一致性（Kappa值为0.775）。
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非洲猪瘟（African swine fever,ASF）是由非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）引起的一种出血性传染性疾病,致使家猪死亡率高达100%,对全球养猪业造成经济损失和严重威胁。CD2v蛋白是ASFV重要的致病因子和保护性蛋白,是非洲猪瘟疫苗设计和免疫检测的靶蛋白之一。本研究在HEK293F细胞中实现重组CD2v蛋白的分泌性表达和糖基化修饰,以纯
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