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哺乳动物研究中,CD2基因主要表达于胸腺细胞,T细胞和NK细胞,通过与CD58（小鼠为CD48）结合,促进T细胞与抗原提呈细胞或靶细胞黏附,提供T细胞活化的协同刺激信号。CD48也是CD244的配体,在小鼠模型中具有促进和抑制T细胞和NK细胞激活的双重作用。然而CD2亚家族在低等的脊椎动物中产生了扩张,多拷贝基因的出现使得功能出现冗余,该家族成员的特征和功能在低等脊椎动物中尚不清楚。本论文以尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus）为研究对象,围绕CD2/CD244-CD48协同信号分子功能,开展了以下四个方面的研究:（1）在不同免疫刺激物或无乳链球菌感染下,通过On CD2,On CD244及On CD48在不同组织器官的表达时序特征,探究On CD2,On CD244及On CD48与罗非鱼免疫应答的相关性;（2）通过酵母双杂交和Pull-down技术确定On CD2/On CD244与On CD48之间的相互作用关系,确定罗非鱼协同信号分子的分子功能基础;（3）通过制备单克隆抗体分选罗非鱼CD2及CD244阳性细胞群,为鱼类T细胞的分选提供合适的标记分子,进一步理解鱼类免疫细胞的组成;（4）构建罗非鱼星形胶质细胞系（TA-02）,体外模拟血脑屏障,探讨脑膜炎模型中CD2/CD244-CD48协同刺激信号对于T细胞活化的影响。该研究将为阐明CD2/CD244-CD48介导的罗非鱼T细胞激活与抑制的分子机理及其免疫应答机制奠定基础,为研制防治罗非鱼链球菌病的新型疫苗提供关键的理论依据。具体研究结果如下:1、依托实验室全长转录组数据及双向Blast筛选结果,成功克隆鉴定了罗非鱼CD2,CD244和CD48基因。On CD2,On CD244,On CD48分子与其他物种序列相似性较低,具有保守的Ig结构域。在健康罗非鱼组织中,On CD2和On CD48能在各组织中被检测到,且高表达于免疫组织中,On CD244仅在健康罗非鱼的脑,血液和头肾组织中表达。LPS,KLH和无乳链球菌感染能诱导组织水平On CD2,On CD244和On CD48显著上调,表明罗非鱼CD2,CD244和CD48参与罗非鱼免疫调控功能。2、亚细胞定位和细胞免疫组化结果表明罗非鱼CD2,CD244及CD48定位于淋巴细胞膜上。酵母双杂交实验显示罗非鱼CD2-CD48,CD244-CD48存在相互作用关系,Pull-down实验表明罗非鱼r On CD2重组蛋白与r On CD48重组蛋白可以相互结合,说明CD2/CD244与CD48互作的关系在罗非鱼上保守。3、制备CD2,CD244单克隆抗体,对罗非鱼CD2阳性细胞和CD244阳性细胞群进行分选及初步鉴定。罗非鱼CD2阳性细胞群表达CD3、CD4、GATA3、IL17、TCRβ、CD247和LCK等分子标记,表明罗非鱼CD2阳性细胞群具有Th细胞的特征。而罗非鱼CD244阳性细胞表达CD8α、CD27、TCR和NCCRP-1等标志分子,表明罗非鱼CD244阳性细胞群具有CD8+T细胞及NCC细胞的特征。LPS,KLH可以刺激罗非鱼头肾,脾脏和外周血中的CD2,CD244阳性细胞在1-3d内显著增加。无乳链球菌感染后,外周血和脾脏中CD2和CD244阳性细胞呈现不同的时序规律,表明On CD2与On CD244在抗无乳链球菌感染过程中参了不同的免疫调控途径。4、成功构建的罗非鱼星形胶质细胞系TA-02,Trans-well培养表现出明显的屏障特性,可作为体外模拟罗非鱼血脑屏障及脑炎模型的研究材料。罗非鱼外周血淋巴细胞和感染无乳链球菌的TA-02共同培养,模拟无乳链球菌感染模型,在加入Anti-On CD2单克隆抗体后,外周血淋巴细胞中T细胞激活信号分子显著上调;加入Anti-On CD244后T细胞活化信号分子被抑制。该结果表明On CD2-On CD48可能为T细胞活化提供共刺激信号,On CD244-On CD48为T细胞活化过程提供共抑制信号。