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目的:针刺虽然作为一种镇痛策略被广泛应用于临床之中,但其镇痛的生物学机制尚未完全阐明,故阐明其机制,有助于提高临床疗效和国际推广。因此,本研究通过探索针刺对完全弗氏佐剂（Complete Freund’s Adjuvant,CFA）小鼠镇痛效应的影响,利用磷酸化蛋白组学技术筛选小鼠脊髓组织参与针刺镇痛的可能关键蛋白及重要信号通路,同时基于本团队前期研究发现脊髓趋化因子CXC配体1（CXC chemokine ligand 1,CXCL1）及其受体趋化因子CXC受体2（CXC chemokine receptor 2,CXCR2）介导针刺镇痛,但具体机制尚不明确,故综合磷酸化蛋白组学分析的结果,进一步探索针刺介导脊髓CXCL1-CXCR2发挥镇痛作用的可能分子机制。方法:首先,通过3种不同的造模剂量以及2种不同的手针针刺方法以热辐射痛和机械痛作为主要效应指标,优选合适剂量的小鼠炎性痛模型和手针针刺方法用于针刺镇痛研究,并用免疫印迹（Western Blotting,WB）和酶联免疫吸附测定法（Enzyme-linked immunosorbent assay,Elisa）分别检测脊髓致痛物质环氧合酶2（Cyclo-oxygen-ase 2,COX2）、前列腺素E2（Prostaglandin E2,PGE2）含量,明确针刺镇痛效应。其次,在针刺镇痛有效的基础上利用磷酸化蛋白组学技术筛选筛选脊髓部位参与针刺镇痛的关键蛋白和重要通路。最后,结合前期针刺CXCL1升高,CXCR2降低镇痛的研究基础,对筛选出的内吞通路进行验证,分别采用Elisa检测脊髓CXCL1含量,采用WB检测脊髓CXCR2、Rab5、Rab11、Rab7、Lamp1含量,采用免疫荧光双标染色检测脊髓组织CXCR2与神经元（Neu N神经元细胞的标记物）、Rab7、Lamp1共定位情况。结果:1.针刺对CFA小鼠镇痛效应影响的实验研究（1）不同造模剂量结果:不同造模剂量（20μL、50μL、100μL）均能降低小鼠热辐射痛和机械痛阈值（P<0.01）,诱导小鼠炎性痛模型。但综合热辐射痛和机械痛结果50μL模型组整体较平稳,故选用50μL的造模剂量。（2）不同针刺方法结果:热辐射痛显示与盐水组相比,模型组、针刺（1）组和针刺（2）组在造模后24h-7天热辐射痛阈值均降低（P<0.05或P<0.01）;与模型组相比,在针刺治疗1-7天,针刺（1）组、针刺（2）组热辐射痛阈值升高（P<0.01或P<0.05）;与针刺（2）组相比,针刺（1）组在第1、2天热辐射痛阈值升高（P<0.05或P<0.01）。机械痛显示与盐水组相比,模型组在造模后24h-7天机械痛阈值降低（P<0.05或P<0.01）,针刺（1）组在造模后第1、7天机械痛阈值降低（P<0.01）,针刺（2）组在造模后第1、3、6、7天机械痛阈值降低（P<0.05或P<0.01）;与模型组相比,在针刺干预治疗后,针刺（1）组在第2、4、7天机械痛阈值升高（P<0.05或P<0.01）,针刺（2）组在第2、7天机械痛阈值升高（P<0.05或P<0.01）;针刺组之间比较无统计学意义（P>0.05）。综合考虑,与模型组相比,针刺（1）组较针刺（2）组的痛阈值升高更明显,且天数更多,因此采用针刺（1）组用于后期研究。（3）脊髓COX2、PGE2结果:脊髓COX2蛋白含量结果显示各组之间比较均无统计学差异（P>0.05）;PGE2蛋白含量结果显示与盐水组相比,模型组升高（P<0.05）,与模型组相比,针刺组降低（P<0.05）。2.基于脊髓磷酸化修饰蛋白组学的针刺镇痛关键蛋白及通路筛选结果（1）针刺具有镇痛效应:与盐水组相比,造模后1-5天,模型组和针刺组的热辐射痛和机械痛在造模后阈值均降低（P<0.01）;与模型组相比,在针刺干预治疗后1-5天,造模侧热辐射痛和机械痛阈值均升高（P<0.05或P<0.01）。（2）蛋白差异修饰分析结果:不同组间比较,差异修饰的蛋白和位点为:模型组VS盐水组上调403个磷酸化位点,对应301个蛋白,下调439个磷酸化位点,对应339个蛋白;针刺组VS模型组上调432个磷酸化位点,对应318个蛋白,下调363个磷酸化位点,对应273个蛋白;针刺组VS盐水组上调424个磷酸化位点,对应298个蛋白,下调434个磷酸化位点,对应322个蛋白。（3）差异修饰蛋白GO功能注释显示,在模型和针刺状态下蛋白参与的生物进程主要与细胞进程,生物调节,刺激反应,发育代谢以及信号传递有关;细胞组成主要位于细胞膜、细胞器、大分子复合物、膜关闭内腔;分子功能主要与结合功能和催化活性相关,同时也与分子功能调节、结构分子活性、运输活动相关。（4）KEGG富集和聚类分析结果:在模型状态下,KEGG富集和聚类分析显示与疼痛相关的通路有4条:c AMP信号通路、缝隙连接、轴突导向、钙信号通路;在针刺状态下,KEGG富集和聚类分析显示与疼痛相关的通路有2条:内吞信号通路、GABA能神经突触信号通路。（5）差异修饰蛋白互作关系结果:在模型和针刺状态下,蛋白功能主要与生物运输和内吞相关。3.针刺调节脊髓CXCL1-CXCR2内吞通路结果（1）脊髓CXCL1-CXCR2内吞通路蛋白变化结果:与盐水组比,模型组CXCL1蛋白含量呈上调趋势,无统计学差异（P>0.05）,与模型组比,针刺组升高（P<0.05）。CXCR2、Rab5、Rab11、Rab7、Lamp1蛋白含量结果显示各组（盐水、模型和针刺）之间均无统计学差异（P>0.05）。（2）免疫荧光双标染色结果:通过半定量分析,CXCR2与Neu N共表达率结果显示各组（盐水、模型和针刺）之间均无统计学差异（P>0.05）,CXCR2与Rab7共表达率和CXCR2与Lamp1共表达率与模型组相比,在针刺后都呈上调趋势,但无统计学差异（P>0.05）。结论:1.针刺双侧足三里穴对CFA炎性痛小鼠具有镇痛效应。2.脊髓部位参与针刺镇痛的关键磷酸化蛋白功能主要与结合功能和催化活性相关,并参与生物调节、运输、内吞等多种生物过程;与针刺镇痛相关的通路主要有内吞信号通路、GABA能神经突触信号通路。3.尚不能证明CXCL1-CXCR2内吞信号通路是脊髓CXCL1参与针刺镇痛的下游信号通路,有待于用多种方法进一步确认。