家蚕丝胶基因启动子的克隆与活性分析及转基因研究

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家蚕丝腺是合成、分泌蚕丝蛋白的重要器官,具有强大的合成和分泌蛋白质的能力。利用家蚕丝腺生物反应器安全、高效地生产药用蛋白具有实用的可行性和很好的应用前景。 本实验以家蚕丝胶基因启动子ser-1、人胰岛素样生长因子hIGF-1、丝素基因轻链多聚腺苷酸信号、丝素基因轻链第一内含子(增强子)以及新霉素抗性基因等为元件,通过多次克隆将它们插入到PigA3GFP转座载体中。经PCR、酶切鉴定及测序验证表明各元件已按照设计的方式插入到PigA3GFP转座载体,分别构建了由SV40启动子和IE-1启动子驱动的新霉素抗性基因所组成的PigA3GFP-hIGF-1.A和PigA3GFP-hIGF-1.B转基因载体。 通过脂质体介导法和精子介导法及基因枪法将转基因载体分别导入BmN细胞和家蚕体内,获得发荧光的BmN细胞和家蚕幼虫。我们确定用于BmN细胞筛选的G418的最佳浓度为700μg/mL~800μg/mL,并已经对转基因BmN细胞进行了连续筛选,获得比例较高的发荧光的BmN细胞。
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