背景肾脏纤维化是各种慢性肾脏病进展最终共同的结局,病变特征表现为炎症细胞浸润、肌成纤维细胞活化增殖、肾小管萎缩以及大量的细胞外基质（extracellular matrix,ECM）沉积,最终由疤痕组织取代正常的肾脏结构,造成肾功能丧失或衰竭。肾脏纤维化呈现局灶性分布的特征,提示局部组织的微环境在其发生发展过程中起着非常重要的作用。肌腱蛋白C（Tenascin-C,TNC）是细胞外基质中的一种大分子糖蛋白,通过与细胞外基质结构蛋白或者细胞表面受体结合,例如整合素（integrin）受体、toll样受体和EGF受体（EGFR）,参与细胞的增殖、分化、迁移、粘附、凋亡以及上皮间充质转化（EMT）等病理生理过程。TNC成年个体的组织和细胞中不表达或低表达,而在胚胎发育、炎性反应以及伤口愈合过程中大量表达,参与组织器官形成、组织损伤修复及纤维化过程。我们课题组先前研究报道,在肾脏纤维化发生发展过程中,活化的成纤维细胞分泌大量TNC并沉积于肾间质,形成促纤维化的微环境,反作用于成纤维细胞自身,进一步促进其活化和增殖,推动和加速肾脏纤维化发生发展。抑制TNC的生成并破坏促纤维化微环境的形成,可有效抑制肾脏纤维化进程。TNC形成的促纤维化微环境可通过不同的机制影响多种细胞的功能,促进肾脏纤维化的发生发展。那么,TNC及富含TNC的微环境是否也会影响肾小管上皮细胞的表型以及功能,从而促进肾脏纤维化的进展?然而,关于这方面的研究目前尚未见任何的报道。我们的研究,可望揭示TNC以及富含TNC的微环境对肾小管上皮细胞的作用及其具体分子机制,为以TNC作为靶点对肾脏纤维化进行诊断、治疗和评估提供理论和实验依据,为CKD的临床诊治提供新的思路和方法。方法我们首先通过酶联免疫吸附实验（ELISA）、蛋白免疫印迹（WB）及免疫组织化学（IHC）法检测CKD患者尿液以及肾活检组织中TNC的表达水平。进一步在小鼠单侧缺血再灌注损伤（UIRI）模型当中,通过尾静脉快速注射以致携带TNC干扰序列的质粒载体进入肾脏中,从而实现体内下调TNC基因的表达。通过WB、实时荧光定量聚合酶链反应（Q-PCR）、IHC以及组织免疫荧光（IF）等方法检测体内敲低TNC表达对肾脏功能、肾小管完整性以及肾脏纤维化的影响。体外实验,我们通过WB、划痕以及Transwell实验检测了 TNC重组蛋白对人近端肾小管上皮细胞系（HKC-8）及小鼠原代近端肾小管上皮细胞的影响。我们进一步在体外模拟了富含TNC的微环境,通过WB实验检测其对肾小管上皮细胞的作用。综合运用WB和IHC等方法在体内和体外探讨了 TNC促进肾脏纤维化发生发展的相关分子机制。最后我们在UIRI动物模型当中,通过腹腔注射粘着斑激酶（FAK）的抑制剂PF573228,以实现体内抑制FAK信号。通过WB、Q-PCR以及IHC等方法检测体内抑制FAK信号对肾脏功能、肾小管完整性以及肾脏纤维化的影响。结果与正常健康人相比,TNC在CKD患者肾脏组织、尿液中均呈高表达,并且尿液TNC的水平与肾脏纤维化程度及CKD进展密切相关。尿液TNC可作为一个早期无创的评估肾脏纤维化以及CKD进展的生物标记物。在UIRI模型中,敲低肾脏TNC的表达能够显著改善肾脏损伤和肾功能,保护肾小管的完整性,抑制肾脏纤维化。在体外实验中,我们发现TNC可诱导HKC-8细胞系以及小鼠原代近端肾小管上皮细胞发生partial EMT。进一步我们发现体外模拟的富含TNC的微环境可以诱导HKC-8发生partial EMT。机制方面,我们通过体内外实验证实了 TNC通过与integrin αvβ6受体结合以激活下游的FAK/MAPK信号通路,诱导肾小管上皮细胞发生partial EMT,从而损伤肾小管的完整性。体内阻断FAK信号能够显著改善肾脏损伤和肾功能,保护肾小管的完整性,抑制肾脏纤维化。结论本研究提示TNC以及富含TNC的细胞外基质微环境通过激活integrinαvβ6/FAK/MAPK信号通路,诱导肾小管上皮细胞发生partial EMT,损伤肾小管的完整性,加速肾脏纤维化的进展。靶向抑制TNC或者FAK信号可阻断肾脏纤维化和CKD的进展,因此可能成为治疗肾脏纤维化的一种新策略。