本课题主要研究富血小板血浆(PRP)对体外培养的SD大鼠成骨细胞增殖和分化的影响，通过以上问题的阐述，深入探讨PRP促进骨缺损修复的细胞学机制及最佳有效浓度，为PRP修复难治性骨缺损的临床应用提供理论指导。 目的：为通过观察亩血小板血浆(PRP)对体外培养的SD大鼠成骨细胞增殖和分化的影响，旨在探讨PRP促进骨修复的细胞学机制及其有效浓度。 方法：1．成骨细胞分离与培养，取24小时内的SD乳鼠头盖骨，采用二次蛋白酶消化及反复贴壁法将成骨细胞与上皮样细胞、成纤维细胞分离。2．成骨细胞的鉴定，取第三代细胞接种于培养皿，细胞生长至汇合时用ALP染色试剂盒按操作步骤染色。3．PRP制备，采用低离心力两次离心法制备，利用血液中各组分的沉降系数不同使得一次离心后血液分为三层，最底层是沉降系数最大的红细胞，最上层是血清，交界处有一薄层(肉眼不易看出)，即富血小板层；一次离心后弃去红细胞层，然后再次离心，可得到凝集成白班状的血小板沉淀(PRP)。4.将体外培养并扩增的第3代SD鼠成骨细胞与不同浓度PRP复合培养，实验分为空白对照、12.5％PRP、25％PRP和50％PI冲组共4组。5.MTT计数，在培养后1、3、5和7d，进行MTT测试。在490nm波长下用酶标测试仪检测各孔光吸收值(A值)。6.ALP活性检测，在培养后1、3、5和7d，在405nm波长下用酶标仪测定各孔光吸收值(A值)。7.钙结节染色，每天观察矿化结节形成情况，一周后用0.1％茜素红染色，以橘红色结节、边界清晰和直径>200 μm为标准作矿化结节计数。 结果：相差显微镜下见PRP组细胞增殖旺盛，与对照组相比，PRP能明显促进成骨细胞的增殖，其作用随PRP浓度的增加而增强。其中，50％PRP组细胞增殖最为显著，且细胞达到汇合的时间也相应缩短。在各时间段，各种浓度的PRP组中成骨细胞的增殖活性均高于对照组(P<0.05)，且与PRP浓度成正比。50％PRP组对成骨细胞增殖刺激作用最强，3、5和7d时与其他PRP组之间相比也有显著性差异(P<0.05)。PRP组中成骨细胞的ALP活性均高于对照组(P<0.05)，且与PRP浓度成正比。以50％PRP组的成骨细胞ALP活性最高，3、5和7d时均显著高于其他PRP组(P<0.05)。钙结节茜素红染色，不同浓度的PRP组的矿化结节数量均显著高于对照组(P<0.05)，其中50％PRP组的矿化结节数量最多，显著高于其他浓度的PRP组(P<0.05=。 结论：PRP含有较高浓度的促进细胞增殖和组织重塑的生长因子，能明显促进体外培养的SD大鼠成骨细胞增殖和分化，其作用效果与PRP的浓度成正比。