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研究背景和目的：胰腺肿瘤微环境是由间质细胞及细胞外成分共同组成，其间质细胞主要包括：活化的胰腺星状细胞（PSC）、内皮细胞和巨噬细胞等。细胞外成分主要包括：细胞外基质（ECM）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、转化生长因子-β（TGF-β）及血管内皮生长因子（VEGF）等。胰腺癌微环境中PSC等间质细胞不仅可以促进肿瘤细胞的生长，同时还可以增加肿瘤细胞在体外对于化疗药物的耐药性。另外，这些细胞因子可以促进PSC激活，最终促使有利于胰腺癌细胞生长的微环境形成。Galectin-1（半乳糖凝集素-1）是一种与β半乳糖有高度亲和性的凝集素蛋白，Galectin-1在多数肿瘤组织中明显高表达。由肿瘤细胞产生的Galectin-1可以明显促进血管内皮细胞的增殖，并可诱导肿瘤组织中微血管的形成，肿瘤血管的形成又为肿瘤增殖与转移提供了有利条件。近来研究发现，在体外培养的激活状态下PSC显著表达Galectin-1，胰腺肿瘤微环境中存在大量激活的PSC，但其产生的Galectin-1与胰腺癌中肿瘤血管形成的关系尚不清楚。本部分首先通过免疫组化分析正常胰腺和胰腺癌组织中Galectin-1表达差异，然后通过构建和包装Galectin-1过表达/干扰的慢病毒载体并感染体外分离培养的人原代PSC，分别利用荧光定量RT-PCR (qRT-PCR)、Western-blot和ELISA检测Galectin-1表达水平，进而为研究胰腺癌中Galectin-1的高表达与胰腺癌组织中血管形成的关系奠定基础。方法：1.分离和培养原代人PSC，对其针对Desmin（静止期标志）和α-SMA（激活期标志）进行免疫组化染色鉴定同时检测不同状态下Galectin-1表达水平。2.通过免疫组织法检测正常胰腺和胰腺癌组织中Galectin-1表达差异。3.构建Galectin-1过表达/RNA干扰的慢病毒载体，感染PSC并筛选。用荧光定量RT-PCR和Western-blot对感染后PSC中Galectin-1mRNA和蛋白表达水平进行鉴定，ELISA检测PSC上清液中Galectin-1蛋白分泌水平。结果：1.成功分离和培养原代人PSC，细胞爬片免疫组化鉴定显示静止期PSC中Desmin(阳性)、α-SMA(阴性)、Galectin-1(弱阳性)；激活期PSC中Desmin(弱阳性)、α-SMA(强阳性)、Galectin-1(强阳性)。2.免疫组化染色结果显示Galectin-1在胰腺癌组织中表达水平比正常胰腺组织明显增高。3.成功构建Galectin-1过表达/RNA干扰的慢病毒载体，荧光定量RT-PCR结果显示过表达组（Over）PSC中Galectin-1表达水平显著高于正常组（Naive）和空载组（GFP）PSC（P<0.01）；而干扰组（Sh-1和Sh-2）PSC中Galectin-1表达水平较Naive组和空白干扰组（Scr）下降了85%以上（P<0.01）；Scr组和GFP组PSC中Galectin-1表达水平与Naive组相比无差异（P>0.05）。Western-blot和ELISA检测各组PSC中Galectin-1蛋白表达与上述结果一致。结论：1.成功分离、培养和鉴定了原代人PSC。2. Galectin-1在激活期PSC/胰腺癌组织中表达水平分别较静止期PSC/正常胰腺组织中显著增加。3.成功构建的Galectin-1过表达/RNA干扰的慢病毒载体能显著增加/降低PSC中Galectin-1表达量。研究背景和目的：Galectin-1作为Galectin家族中的一员，与含有β-半乳糖糖苷的糖轭合物类受体具有高度亲和力。参与细胞黏附、生长调节和免疫反应等多种生物学功能。Galectin-1在肿瘤组织高表达，可以促进肿瘤的免疫抑制、肿瘤细胞增殖、侵袭和转移等，肿瘤组织中Galectin-1表达水平增加还与肿瘤内血管形成密切相关。第一部分实验结果表明在肿瘤微环境中激活后PSC表达Galectin-1显著增高。本部分研究通过体内、外实验检测不同Galectin-1表达水平的PSC及其与胰腺癌肿瘤细胞混合培养下对血管形成能力的影响，同时检测胰腺癌组织中Galectin-1表达与微血管密度(MVD)的关系并与正常胰腺组织进行比较。探讨胰腺癌组织中PSC的Galectin-1表达与MVD相关性。方法：1.体外实验检测不同Galectin-1表达水平的PSC及其与胰腺癌肿瘤细胞混合培养下细胞上清对血管内皮细胞（HUVEC）增殖、迁移及小管形成能力的影响。2.裸鼠皮下成瘤实验检测Galectin-1表达和血管形成数量的关系。3.在正常胰腺组织和不同病理分级的胰腺癌组织中检测Galectin-1表达与微血管数量，分析胰腺癌组织中Galectin-1表达与MVD相关性。结果：1. Galectin-1高表达组PSC上清对HUVEC增殖、迁移及小管形成能力较Galectin-1干扰组PSC明显增强（P<0.01）；Galectin-1高表达组PSC与胰腺癌细胞株CFPAC-1/BXPC-3混合培养上清对HUVEC增殖、迁移及小管形成能力较Galectin-1干扰后混合培养组显著增强(P<0.01）。2.裸鼠皮下种植瘤试验中，高表达PSC与CFPAC-1/BXPC-3组混合种植较正常PSC与CFPAC-1/BXPC-3组混合种植时血管形成数量明显增加，但干扰PSC与CFPAC-1/BXPC-3组和单纯CFPAC-1/BXPC-3组种植较正常PSC与CFPAC-1/BXPC-3组混合种植血管形成数量明显减少。在裸鼠种植瘤实验中单纯PSC组无实体瘤形成。3.人胰腺癌组织标本中Galectin-1表达与MVD数量呈正相关（P<0.0001），其中分化程度越低，Galectin-1表达和MVD数量越高。胰腺癌组织MVD数量较正常胰腺组织明显增高（P<0.05）。结论：1．体外实验中结果显示PSC中高表达Galectin-1可显著促进HUVEC增殖、迁移及小管结构的形成，而Galectin-1表达下调时则作用表现相反。2.裸鼠皮下种植瘤中Galectin-1表达与瘤组织中血管数量成正相关。3.胰腺癌组织中Galectin-1表达与胰腺癌MVD数量成正相关，胰腺癌中Galectin-1表达和MVD数量及胰腺癌分化程度密切相关，其表达水平随着组织学分化程度的降低而增高。