【摘 要】
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目的：结直肠癌是世界范围内常见的消化道恶性肿瘤之一,也是死亡率最高的肿瘤之一。在结直肠癌的综合治疗方案中,药物化疗有着不可替代的重要作用。然而化疗药的毒副作用及耐药性限制了其在临床上的进一步应用。本研究将表没食子儿茶素没食子酸酯（（-）-Epigallocatechin gallate, EGCG）与顺铂或奥沙利铂联合作用于结直肠癌细胞,观察其细胞毒性的变化,并探讨变化的机制,试图寻找能增强化疗敏
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目的：结直肠癌是世界范围内常见的消化道恶性肿瘤之一,也是死亡率最高的肿瘤之一。在结直肠癌的综合治疗方案中,药物化疗有着不可替代的重要作用。然而化疗药的毒副作用及耐药性限制了其在临床上的进一步应用。本研究将表没食子儿茶素没食子酸酯（（-）-Epigallocatechin gallate, EGCG）与顺铂或奥沙利铂联合作用于结直肠癌细胞,观察其细胞毒性的变化,并探讨变化的机制,试图寻找能增强化疗敏感性的化疗药物辅剂,为临床用药提供理论依据。方法：1.MTS法检测各组药物作用于DLD-1、 HT-29细胞后细胞的存活率,比较EGCG与顺铂或奥沙利铂联合使用相比单药使用时对细胞毒性的变化以及用自噬抑制剂3-MA抑制细胞内自噬水平或siRNA下调特异性自噬基因后EGCG与顺铂或奥沙利铂联用对细胞毒性的变化。2. western blot检测细胞中LC3-Ⅱ的表达水平、实时荧光定量PCR检测细胞内自噬基因的表达、吖啶橙（Acridine orange, AO）染色后流式细胞术检测荧光强度及透射电镜下观察自噬泡的形成来评估细胞内自噬水平的高低,比较EGCG与顺铂或奥沙利铂联合使用相比单药使用时细胞内自噬水平的变化。3.自噬抑制剂3-MA抑制细胞内自噬水平或siRNA （si-Atg5）转染细胞下调特异性自噬基因后,western blot检测细胞中LC3-Ⅱ、Atg5的表达水平,并用MTS法检测细胞存活率,比较此时EGCG与顺铂或奥沙利铂联用对细胞毒性的变化。结果：1.EGCG与顺铂或奥沙利铂联合作用于DLD-1、 HT-29细胞增强了药物对细胞的毒性,对细胞的增殖表现出协同抑制作用。2. EGCG可诱导细胞自噬,且与顺铂或奥沙利铂联合作用于DLD-1、 HT-29细胞时增强了细胞自噬内水平。3.自噬抑制剂3-MA抑制细胞内自噬水平以及siRNA （si-Atg5）转染细胞下调特异性自噬基因后,均可逆转EGCG与顺铂或奥沙利铂联用时对细胞表现出来的协同抑制作用。结论：EGCG可以通过上调细胞内自噬水平增强顺铂和奥沙利铂对结直肠癌细胞的细胞毒作用。
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