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目的通过建立大鼠酒精性骨质疏松模型,观察纳豆激酶(Nattokinase)对酒精性骨质疏松(Alcohol-Induced Osteoporosis,AOP)骨代谢及骨矿化的影响,并初步探讨其改善酒精性骨质疏松作用的机制。方法1.动物分组及模型建立:SPF级雄性Wistar大鼠60只,适应性喂养1周后,按体重随机分为4组:正常对照组、酒精模型组、纳豆激酶对照组、纳豆激酶干预组,每组15只。给药方法如下:正常对照组给予生理盐水灌胃;酒精模型组给予56°红星二锅头灌胃,剂量依次为6ml/(kg·bw·d)1周,8ml/(kg·bw·d)1周,10ml/(kg·bw·d)1周,11 ml/(kg·bw·d)7周;纳豆激酶对照组给予530FU/(kg·bw·d)纳豆激酶灌胃,纳豆激酶干预组给予530FU/(kg·bw·d)纳豆激酶和酒精灌胃,纳豆激酶干预组的酒精剂量与酒精模型组相同,实验周期10周。末次灌胃后禁食不禁水12h,戊巴比妥钠进行腹腔注射麻醉,腹主动脉取血,剥离双侧完整股骨,左侧股骨用于HE标本,右侧股骨存于-80℃冰箱备用。2.使用DEXA骨密度仪及其配套的处理软件检测大鼠股骨骨密度(BMD)。3.利用HE染色法观察股骨结构的病理学变化。4.利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清骨钙素(BGP)、骨形成蛋白-2(BMP-2)浓度以、血清内毒素及血液炎性细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)。5.利用中电感耦合等离子体发射光谱法检测血清中钙(Ca)、磷(P)含量以及骨中钙(Ca)、磷(P)含量。结果1.BMD结果显示,酒精模型组明显低于正常对照组(P<0.05);与酒精模型组相比,纳豆激酶干预组BMD明显升高,有统计学差异(P<0.05)。2.股骨组织切片HE染色结果显示,正常对照组骨小梁致密、规则且较粗,粗细均匀;酒精模型组骨小梁稀松、不规则、粗细不均,甚至可见骨小梁断裂;纳豆激酶干预组骨小梁致密、规则、较厚、粗细均匀,未见骨小梁断裂。3.血清BGP、BMP-2测定结果显示,与正常对照组相比较,酒精模型组血清BGP、BMP-2均明显降低,且有统计学差异(P<0.05),但纳豆激酶对照组与正常对照组各项指标结果相近,纳豆激酶干预组大鼠血清BGP、BMP-2水平均较酒精模型组有显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。4.血清内毒素指标结果显示,与正常对照组相比,纳豆激酶对照组无明显变化,酒精模型组大鼠血清内毒素水平显著上升(P<0.05);与酒精模型组比较,纳豆激酶干预组大鼠血清内毒素水平显著下降(P<0.05)。5.与正常对照组比较,酒精模型组的TNF-α和IL-1β水平显著增高,差异具有统计学意义(p<0.05);而纳豆激酶干预后显著抑制炎性因子增高,与酒精模型组对比,TNF-α和IL-1β水平显著降低,具有统计学意义(p<0.05)。6.与正常对照组比较,酒精模型组大鼠血清的Ca、P含量均显著下降,差异具有统计学意义(p<0.05);纳豆激酶干预组与酒精模型组相比,血清Ca、P含量均有所提高,且具有统计学意义(p<0.05)。7.酒精模型组大鼠股骨Ca、P含量较正常对照组明显下降,且差异具有统计学意义(p<0.05);纳豆激酶干预组较酒精模型组,股骨Ca、P含量均有显著升高,且差异具有统计学意义(p<0.05)。结论:1.一定量的酒精摄入会导致大鼠骨吸收增强和骨矿化率下降。2.纳豆激酶在一定程度上可以改善酒精性骨质疏松,其机制可能是通过抑制酒精引起的大鼠骨组织TNF-α、IL-1β表达上调,增强BGP、BMP-2活性,改善骨代谢,提高骨矿化率,进而改善酒精性骨质疏松症状。