粒毛盘菌YM404黑色素的纯化、结构及抗紫外辐射活性研究

来源 :合肥工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:vitalee
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本文对粒毛盘菌YM404黑色素的发酵条件、胞内黑色素的提取工艺、胞外黑色素的分级分离、结构、抗紫外辐射活性以及染色效果进行了研究,主要结果如下:考察碳源、氮源、金属离子以及生长调控因子等对粒毛盘菌YM404菌株生长及黑色素积累的影响,获得其最适发酵条件为:麦芽糖25g/L,酵母膏6g/L,氯化铁1mmol/L,L-DOPA1.25mmol/L,蒸馏水1L,26℃,160r/min恒温振荡培养10d。在此条件下,粒毛盘菌黑色素的生物量较优化前增加了14.62%,黑色素产量较优化前提高了22.74%。在单因素实验的基础上,采用响应面优化获得超声波辅助提取粒毛盘菌YM404胞内黑色素(LIM404-2)的最佳提取条件为:NaOH浓度为1.5mol/L、超声功率82W、提取温度75℃、提取时间33min;对酶种类、酶液浓度、液料比对YM404胞内黑色素得率影响进行研究,获得酶解法提取粒毛盘菌YM404胞内黑色素(LIM404-3)的最佳条件为:4%中性蛋白酶液,液料比为20:1,37℃下提取4h。LIM404-2得率为12.50%,较碱溶酸沉法提取获得的LIM404-1得率提高了5.04%,较LIM404-3得率提高了12.25%。LIM404-1、LIM404-2和LIM404-3的红外光谱分析表明,三种黑色素均具有真菌黑色素的特征吸收峰,其余各特征吸收峰位置相近,表明不同的提取工艺获得的是同一种类吲哚型黑色素。相比于LIM404-1和LIM404-2,LIM404-3的结构最完整。总抗氧化活性测定结果表明三种黑色素菌具有较强的总抗氧化能力,其中LIM404-3的总抗氧化能力最强。从粒毛盘菌YM404发酵液中提取获得胞外黑色素LEM404,分级分离后获得5种均一组分,分别为LEM404-a、LEM404-b、LEM404-c、LEM404-d和LEM404-e。其中LEM404-a为主要组分,其含量为57.78%,分子量为432.18。依据元素分析及质谱推断其分子式为C22H12N2O4S2,为棕黑色素。红外光谱分析表明LEM404-a具有真菌黑色素的特征吸收峰,并具有典型的吲哚结构。热解-GC-MS与1H NMR的分析结果表明LEM404-a的基本骨架为吡咯与苯环,确定其结构式为在紫外辐射下,LEM404-a可显著提高大肠杆菌、金黄色葡萄球菌以及啤酒酵母的存活率。小鼠抗辐射实验结果表明,高辐射剂量实验组(HE组)小鼠皮肤基本未出现水肿、角质化及褐色素沉着,而低辐射剂量实验组(LE组)小鼠皮肤表征接近于空白对照组(BC组)。与对照组(LC组与HC组)小鼠相比,实验组(LE组与HE组)小鼠SOD、GSH-PX活性明显提高,MDA含量明显降低,表明LEM404-a具有较强的抗紫外辐射活性。配制六种不同配方(LEM404-a与对苯二胺的添加量不同)的染发剂,对人白发进行染色,结果表明以LEM404-a为原料配制的染发剂染色效果较好且毒性低,但LEM404-a本身不能使白发着色。
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