广西BTV感染及传播媒介调查、病毒分离鉴定与致病性初步研究

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蓝舌病(bluetongue, BT)是由蓝舌病毒(bluetongue virus, BTV)引起的出血性疾病,目前已报道27个血清型。BT广泛分布于温带、亚热带及热带地区,通过嗜血媒介昆虫吮吸带毒血液后叮咬易感动物传播,反刍动物均能感染,羊、牛为本病主要易感动物。利用本实验室采集2009-2015年广西13市6683份牛羊血清,在检测出2032份BTV抗体阳性血清样品中,以C-ELISA方法筛选出500份强阳性血清,与OIE公布的BTV 1-24型标准毒株分别进行微量血清中和试验,发现广西畜群中存在BTV-1、2、3、4、5、8、9、11、15、16、17、18、19、20、22、23及24等17个血清型。其中,BTV-5、8、11、13、17、18、19、20、22为国内首次报道。统计分析表明,BTV-1、2和4为广西流行的优势血清型。此外,本研究还发现,广西畜群存在BTV不同血清型的混合感染。本研究在南宁市隆安县、玉林市兴业县、北海市合浦县设立三处监控点并对监控点采集的传播媒介样品进行鉴定。共鉴定出7个库蠓品种,除已报道过的尖喙库蠓、肩宏库蠓、荒川库蠓、异域库蠓,还新发现了淡角库蠓、光胸库蠓和无害库蠓。其中尖喙库蠓、荒川库蠓、异域库蠓为已知的BTV传播媒介。对监控点采集的2015年10-11月份哨兵动物的100份肝素钠抗凝血进行病毒分离,以鸡胚接种(E)、 BHK 21细胞传代(B)、C6/36细胞传代(A)三种途径共分离得到23株病毒。通过AC-ELISA及qPCR方法鉴定,其中18株为BTV。通过微量病毒中和试验及病毒型特异性基因VP2扩增确定分离毒株的血清型。目前已确定5株病毒分属3个血清型,除一株为羊源BTV-16外,其余4株为牛源毒株,包括BTV-1、BTV-21各一株,BTV-16二株。对上述毒株的VP2、VP7和NS3/NS3A三个基因节段进行遗传进化分析,发现广西分离株的上述基因大部分属于BTV东方亚群,与日本、印度株同源性高。但来自羊源BTV-16的VP7节段却属于西方亚群,提示,该毒株的基因组可能发生分子重配,该片段或许来自外来毒株。选取牛源BTV-16型毒株人工感染牛与猪,对其致病性进行初步研究。攻毒8天后,实验牛仅观察到鼻黏膜充血,剖检仅见咽喉黏膜充血,睾丸有出血点等轻微病变,未观察到舌发绀,口腔溃疡,肺充血、水肿等BT典型症状; qPCR检测显示,外周血液中的病毒含量最高,其次是肺脏和脾脏,病毒的体内分布与早前报道一致。而在40天的试验周期内,试验猪各组织器官中均未检出BTV核酸,表明分离毒株在猪体内不增殖。
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