目的长链非编码RNA(即lnc RNA:long non-coding RNA)是RNA转录子的一个子集,其长度大于200个核苷酸,多由转录而来,几乎不具有蛋白质编码翻译的功能,但其在蛋白的翻译过程中发挥多种作用,具有极其重要的调控功能。其中的长链非编码RNA NRON(nc RNA repressor of the nuclear factor of activated T cells)是活化T细胞核因子NFAT(nuclear factor of activated T cells)的非编码RNA抑制物,是常见的关于细胞核运输的Lnc RNA。NFAT是一种非常敏感的转录因子,最早的时候是在活化T细胞的和提取物中发现的。近年来研究表明,NFAT在心脏、肌肉组织、神经组织等的发育、分化中起到了关键的作用。已有研究表明Lnc RNA NRON通过促进活化T细胞3(NFATc3)核因子的磷酸化并抑制其细胞核物质的输入从而减轻心房纤维化的进展。越来越多的研究也表明,在心肌纤维化的发展进程中,心脏组织中存在了大量的促炎细胞,例如巨噬细胞等(macrophages)。巨噬细胞作为重要的天然免疫细胞,其功能的表型可以在炎性反应中极化为两种形态,即M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞(M1 and M2 macrophages)。本论文的研究的目的是探讨活化T细胞核因子的Lnc RNA非编码抑制物(Lnc RNA NRON)在心房纤维化中的作用,并探讨其潜在机制是否与巨噬细胞极化有关。方法小鼠的原代心房肌细胞进行传代培养、与相关质粒进行细胞转染后进行细胞共培养。构建NRON过表达载体(NRON)及对照(Vector),并合成特异性抑制NRON表达的NRON si RNA(si-NRON)及对照si RNA(si-Ctrl)。采用酶联免疫吸附测定检测细胞培养中的IL-1β,TNF-α和IL-12水平从而发现Lnc RNA NRON对Ang II诱导的心肌细胞炎症反应的作用。western blot检测NFATc3、p-NFATc3的表达水平以及出入核情况及检测Collagen I、Collagen III的表达水平。q RT-PCR检测IL-12的表达和巨噬细胞中i NOS、IFN-γ、Arg-1、IL-10的表达水平。采用荧光素酶活性实验和Ch IP分析NFATc3与IL-12基因启动子的结合情况。流式细胞仪检测M1和M2巨噬细胞的比例。结果实验中利用促炎细胞因子的酶联免疫吸附试验(ELISA)分析显示,NRON过度表达被抑制后使得NRON沉默,从而更加促进了血管紧张素II(Ang II)诱导的原代培养的心房肌细胞的炎症反应,进而加重了心房肌细胞的心肌纤维化。同时我们利用染色质免疫沉淀法(即Ch IP:Chromatin immunoprecipitation)的结果表明,激活的T细胞3(NFATc3)的核因子被募集到了心房肌细胞中白介素(IL)12(IL-12)的启动子区域。进一步的数据表明,活化T细胞核因子(NFAT)的Lnc RNA非编码抑制物(NRON)的过度表达被抑制后,NRON的沉默进一步促进了Ang II诱导的心房肌细胞中NFATc3的核转运和IL-12的表达。而且,将RAW264.7型巨噬细胞与来自用NRON和IL-12过度表达载体转染的Ang II处理后的心房肌细胞的条件培养基一起培育,IL-12的过度表达消除了NRON过度表达介导的RAW264.7巨噬细胞向M1样表型极化的过程。另外,将小鼠心房成纤维细胞与如上所述处理的来自RAW264.7巨噬细胞的培养基一起培育。IL-12的过度表达挽救了小鼠心房成纤维细胞中纤维化标记胶原I/III的NRON过量表达抑制蛋白水平。结论总体而言,我们的数据表明,lnc RNA NRON能够通过抑制由心房肌细胞激活的M1型巨噬细胞从而减轻心房纤维化的进程。