论文部分内容阅读
目的：探讨益气化瘀解毒方对HCT116-I uc2裸鼠结直肠癌模型循环肿瘤细胞的影响,揭示益气化瘀解毒方对结直肠癌循环肿瘤细胞干预作用的可能作用机制。方法：1.通过对HCT116-LUC2细胞培养及裸鼠造模,免疫磁珠筛选HCT116-luc2裸鼠结直肠癌模型循环肿瘤细胞,再用Vastern-bl ot实验方法测定成瘤后的裸鼠循环肿瘤细胞中Tβ RI、Tβ RII、smad2、smad3、smad4、smad6、 snaid7蛋白水平。2.将筛选的循环肿瘤细胞经裸鼠尾静脉注射成瘤后,观察其成瘤情况及转移率。3.随机将HCT116-luc2裸鼠结直肠癌模型分为空白模型组、益气化瘀解毒组、5-FU组,再用Vastern-bl ot实验方法测定HCT116-luc2裸鼠结直肠癌模型循环肿瘤细胞中T(3 RI xT( snaid7蛋白水平,用ELISA法检测三组成瘤裸鼠血清中TGF-(3 1含量,揭示益气化瘀解毒方对结直肠癌循环肿瘤细胞干预作用的可能作用机制,为临床提供有效的实验依据。结果：1.以EpGWligh为标记筛选HCT116-luc2裸鼠结直肠癌循环肿瘤细胞的成瘤情况良好,成瘤率达到90-%,易出现转移,出现肝转移为60%,出现肺转移为40%,肝肺同时出现转移为35%,而以EpGWlw为标记筛选的细胞不能成瘤,未出现转移,但是以gh为标记筛选的细胞仍有部分(10%)不能成瘤。2.与空白模型组比较益气化瘀解毒组能明显降低循环肿瘤细胞的Tβ RⅠ、Tβ RⅡ、Snaid4蛋白表达的水平同时升高Snad7蛋白表达水平,两组比较具有统计学意义；与空白模型组比较5-FU组能降低Snad4蛋白、升高Snad7蛋白表达的水平,不能降低Tp RⅠ、Tp RTT、Snad3蛋白表达的水平；三组比较snaid3、Snaid6比较无变化；成瘤裸鼠血清中TGF-β1含量比较：空白模型组与益气化瘀解毒组两组比较,t=5.344,P<0.01,具有显著统计学意义；空白模型组与5-FU组两组比较,t=1.695,P>0.05,无统计学意义。结论：1.以EpCAltfgh为标记筛选的HCT116-luc2裸鼠结直肠癌循环肿瘤细胞成瘤情况良好易出现转移而以EpCAM为标记筛选的循环肿瘤细胞不能成瘤符合循环肿瘤细胞EpCAM为标记易成瘤的特点,但是仍有部分(10%)不能成瘤,值得进一步探讨,以EpCAM为标记筛选的循环肿瘤细胞存在假阳性率?故循环肿瘤细胞表型标准化值得进一步探讨及更深入的研究；2.益气化瘀解毒方能明显降低TβRI、Tβ RⅡ、Snad3、Snad4蛋白表达的水平同时升高Snaid7蛋白表达水平,对snaid2、smaid6蛋白无影响,能降低成瘤裸鼠血清中TGF-β1含量,而5-FU组能降低Smad4蛋白、升高Smad7蛋白表达的水平,不能降低Tβ RⅠ、Tβ RⅡ、Smad3蛋白表达的水平,对smad2、smad6蛋白无影响,不能降低成瘤裸鼠血清中TGF-β1含量。益气化瘀解毒方能明显影响结直肠癌裸鼠模型循环肿瘤细胞TGF-β/Smads通路的信号强度。